【摘要】：馬駝乳具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和較高的藥用價(jià)值,其乳清蛋白中含有豐富的保護(hù)性蛋白,且含有較高活性的抗菌因子。本研究以駝乳和牛乳乳清蛋白為原料,研究了胃蛋白酶及胰蛋白酶的酶解工藝,確定了最適酶解條件;采用超濾技術(shù)對(duì)酶解得到的多肽進(jìn)行初步分離,通過葡聚糖凝膠層析得到了具有抗菌活性的乳清蛋白肽,本文的主要試驗(yàn)結(jié)果如下:1.以抑菌率為評(píng)價(jià)指標(biāo),利用響應(yīng)面法優(yōu)化技術(shù)對(duì)胃蛋白酶和胰蛋白酶制備抑菌肽的工藝進(jìn)行了優(yōu)化。獲得胃蛋白酶最佳酶解駝乳乳清蛋白工藝參數(shù):酶解溫度為40.16℃、酶解pH為3.00、酶解時(shí)間為5.36 h,酶解底物濃度為4%,酶與底物濃度比為1:100,抑菌率為84.03%;獲得胃蛋白酶最佳酶解牛乳乳乳清蛋白工藝參數(shù):酶解溫度為39.24℃、酶解pH為3.00、酶解時(shí)間為4.89 h,酶解底物濃度為4%,酶與底物濃度比為1:100,抑菌率為82.11%;獲得胰蛋白酶最佳酶解駝乳乳清蛋白工藝參數(shù):酶解溫度為45.36℃、酶解pH為8.58、酶解時(shí)間為3.57 h,酶解底物濃度為4%,酶與底物濃度比為1:100,抑菌率為73.01%;獲得胰蛋白酶最佳酶解牛乳乳清蛋白工藝參數(shù):酶解溫度為40.96℃、酶解pH為7.78、酶解時(shí)間為3.93 h,酶解底物濃度為4%,酶與底物濃度比為1:100,抑菌率為73.56%;通過SDS-電泳鑒定了水解程度,得出駝乳相較于牛乳更易被蛋白酶水解從而證明其更易消化吸收。2.對(duì)酶解液進(jìn)行超濾和葡聚糖凝膠層析純化處理,得出具有較強(qiáng)抑菌活性的組分,分別為胃蛋白酶酶解駝乳和牛乳乳清蛋白抗菌肽組分G-25-2和G-25-2'以及胰蛋白酶酶解駝乳和牛乳乳清蛋白抗菌肽組分G-25-2和G-25-1 '。3.氨基酸分析結(jié)果表明,駝乳胃蛋白酶的G-25-2組分中疏水性氨基酸(65.76%)及堿性氨基酸(32.8%)的含量均高于牛乳的G-25-2'組分(分別為51.77%和31.77%);駝乳胰蛋白酶的G-25-2組分中堿性氨基酸(28.13%)的含量高于牛乳的G-25-1'組分(25.07%),但其疏水性氨基酸(51.29%)的含量低于牛乳的G-25-1'組分(57.69%)。在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),駝乳胃蛋白酶G-25-2的抑菌肽組分中脯氨酸的含量(32.34%)顯著高于其它抗菌肽組分中脯氨酸的含量(p0.05),進(jìn)一步說明了駝乳胃蛋白酶抗菌肽的抑菌活性強(qiáng)于牛乳抗菌肽。4.分子量分析結(jié)果表明,胃蛋白酶酶解的駝乳和牛乳抗菌肽組分G-25-2和G-25-2'的分子量范圍分別為651.35～673.33 Da和516.81～1070.6 Da;胰蛋白酶酶解的駝乳和牛乳抗菌肽組分G-25-2和G-25-1'的分子量范圍分別為508.24～1438.77 Da 和 533.29～1665.66 Da。5.研究各組分的穩(wěn)定性及抑菌特性。以大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌為指示菌,測(cè)定各組分的最小抑菌濃度和生長(zhǎng)曲線的抑制作用,并以大腸埃希氏菌為指示菌研究了高溫和不同pH對(duì)抗菌活性的影響。結(jié)果表明:各組分對(duì)高溫穩(wěn)定且在酸性條件下抑菌效果明顯,中性條件下抑菌效果變?nèi)?而在堿性條件下,抑菌效果劇烈下降。
【圖文】：

２．５．１各蛋白酶單因素試驗(yàn)結(jié)果逡逑２．邋５．１．１不同溫度對(duì)駝乳和牛乳乳清蛋白水解度的影響逡逑從圖１中可以看出，四種蛋白酶的水解度均隨著溫度的升高呈先增大后減小的逡逑趨勢(shì)，，駝乳和牛乳胃蛋白酶的水解度均在在４０邋°Ｃ時(shí)達(dá)到最大值，胰蛋白酶和木瓜逡逑蛋丨＇Ｉ酶的水解度均在４５邋°Ｃ時(shí)達(dá)到最大值，而堿性蛋白酶的水解度則在５０邋°Ｃ時(shí)達(dá)到逡逑Ｍ人。其原因是由于在一定的溫度范圍內(nèi)，溫度升高反應(yīng)物分子獲得能量，反應(yīng)速逡逑率加快，從而使水解度增大，但溫度過高會(huì)導(dǎo)致蛋白酶變性失活，從而使反應(yīng)速率逡逑Ｋ降，水解度降低［８７］。對(duì)于駝乳乳清蛋白而言木瓜蛋白酶水解物，在４５邋°Ｃ和５０邋°Ｃ逡逑T的水解度沒有明顯差異，考慮到酶解溫度越高酶的活性越不穩(wěn)定，因此胃蛋白酶、逡逑胰蛋丨＇丨酶、木瓜蛋內(nèi)酶和堿性蛋白酶的較適酶解溫度分R%為４０邋°Ｃ、４５邋°Ｃ、４５邋°Ｃ和逡逑５０邋°Ｃ；對(duì)于牛乳乳清蛋白各蛋白酶水解的最適酶解溫度亦分R%為４０邋°Ｃ、４５邋°Ｃ、４５邋°Ｃ逡逑和邋５０邋°Ｃ。逡逑

ｐＨ值過低或者過高都會(huì)使酶失活從而影響酶的作用效果。在最佳ｐＨ條件下，逡逑酶保持其最優(yōu)的空間結(jié)構(gòu)，酶活性中心與底物的結(jié)合最好，因此，在最適ｐＨ條件逡逑下，酶具有最佳的催化活性。由圖２可知，不同的蛋白酶對(duì)酸堿環(huán)境的要求不同，逡逑對(duì)于駝乳乳清蛋白而言，胃蛋白酶，木瓜蛋白酶，胰蛋白酶和堿性蛋白酶分別在逡逑ｐＨ＝２，邋ｐＨ＝６，ｐＨ＝８．５和ｐＨ＝９．５時(shí)酶解物的水解度達(dá)到最大值；而對(duì)于牛乳乳清蛋逡逑白而言，胃蛋白酶，木瓜蛋白酶，胰蛋白酶和堿性蛋白酶分別在ｐＨ＝２．５，邋ｐＨ＝６，逡逑ｐＨ＝８和ｐＨ＝９．５時(shí)酶解物的水解度達(dá)到最大值。逡逑ｆｉｆｌｌｆｆ—一邐麗麗．１逡逑：ｔｔｍｍ邐－ｏ－ｍｓａｍ邋Ｉ逡逑Ａ邐．．．．．．．＿邐0邐４ｕｍＭ逡逑ｙ＼邐0邐Ｉ－，－鋮性蛋＿逡逑？邋ｊ、邐嚴(yán)一逡逑，邐ｒ邐＼邐ｙ逡逑＊邋Ａ逡逑／＼逡逑ｉ．？－邐／邐ｇ邐Ａ逡逑２邋ｚ邋Ｅｌ°＇邐／邋＼逡逑８－八邐Ａ逡逑？ｓ邋－逡逑邐ｊ邐邐邐ｊ邐邐邐＼邐，邐ｔ邐．邐ｓ邐；逡逑２邐１邐貧邐c坼巍懾巍觶ュ喂儒危儒危齲╁義希咤褰忮澹穡儒義賢跡插澹穡榷勻榍宓鞍姿舛鵲撓跋戾義希疲椋紓酰潁澹插澹牛媯媯澹悖翦澹錚駑澹恚椋歟脲澹鰨瑁澹澹瑁洌潁錚歟螅椋簀澹穡儒澹錚鑠澹模儒義獻(xiàn)ⅲ海粒和杖槿榍宓鞍�；n號(hào)Ｈ槿榍宓鞍族義

本文編號(hào)：2654406