納他霉素作為一種安全高效的真菌抑制劑在食品產(chǎn)業(yè)和臨床中廣泛使用,但其工業(yè)生產(chǎn)水平仍有很大的上升空間。課題從工業(yè)生產(chǎn)菌恰塔努加鏈霉菌L10出發(fā),對生產(chǎn)菌進(jìn)行重構(gòu),并基于合成體系對發(fā)酵環(huán)境的應(yīng)答進(jìn)行發(fā)酵工藝優(yōu)化研究,為大幅降低納他霉素生產(chǎn)成本提供基礎(chǔ)。本研究通過對合成體系定向改造,成功構(gòu)建了穩(wěn)定的高產(chǎn)菌。通過erm E*p強啟動子對納他霉素生物合成過程中的四個限速酶—GDP-甘露糖脫水酶(Scn J)、氨基轉(zhuǎn)移酶(Scn C)、海藻糖胺轉(zhuǎn)移酶(Scn K)、細(xì)胞色素P450單加氧酶(Scn D)進(jìn)行高表達(dá),以及途徑特異性調(diào)控蛋白(Scn RII)、PKS輔基化蛋白—磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶(PPTase)進(jìn)行了組合過表達(dá),從而實現(xiàn)合成途徑限速酶、調(diào)控途徑、蛋白后修飾等的遺傳改造,重構(gòu)了納他霉素合成生物體系(ZY01),發(fā)酵單位較出發(fā)菌株提高1.5倍。同時,我們完成了高產(chǎn)菌培養(yǎng)基與發(fā)酵工藝優(yōu)化,并成功進(jìn)行了小試。首先通過碳氮源優(yōu)化,得到較優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基為黃豆餅粉15 g/L、酵母粉4.1 g/L、牛肉膏2.2 g/L、葡萄糖59 g/L,納他霉素效價達(dá)到5.435 g/L,較培養(yǎng)基優(yōu)化前提高了...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1納他霉素分子結(jié)構(gòu)

浙江大學(xué)碩士論文第一章緒論2圖1.1納他霉素分子結(jié)構(gòu)納他霉素屬于大環(huán)內(nèi)酯聚酮類的多烯類，在非常低的濃度就具有較強的廣譜抑菌活性，因此被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)，以防止奶酪和其他非無菌食品(如腌肉)受到霉菌污染。同時它是唯一被美國FDA認(rèn)可為GRAS(一般認(rèn)為是安全的)的抗真菌藥物，近5....

圖1.2納他霉素生物合成途徑[44]

浙江大學(xué)碩士論文第一章緒論4域（DH），分別負(fù)責(zé)將羰基還原成羥基以及脫去一個水分子從而將羥基轉(zhuǎn)變成雙鍵。因此經(jīng)過這三個模塊的延伸后，聚酮鏈上形成了一個包含三個共軛雙鍵的發(fā)色基團(tuán)。但由于模塊1不含有DH模塊，因此在第一步延伸時會在β碳位置上增加含一個羥基的兩碳單位。聚合酶PimS2....

圖1.3途徑特異性調(diào)控因子對納他霉素生物合成基因的調(diào)控模式圖[29]

浙江大學(xué)碩士論文第一章緒論7的轉(zhuǎn)錄，而scnRI則是通過調(diào)控scnRII達(dá)到間接調(diào)控簇內(nèi)基因的結(jié)果[28]。圖1.3途徑特異性調(diào)控因子對納他霉素生物合成基因的調(diào)控模式圖[29]1.5.2全局性調(diào)控在納塔爾鏈霉菌中，無機磷酸鹽對納他霉素的生物合成特別敏感，濃度低至2mM足以大幅度降....

圖2.1海藻糖胺合成途徑

浙江大學(xué)碩士論文第二章納他霉素合成生物體系構(gòu)建22（5）12000rpm室溫離心10min，收集有機相，用0.45μm有機膜過濾，進(jìn)行高效液相檢測；（6）HPLC檢測條件見劉水平博士畢業(yè)論文（進(jìn)樣量10μl）。2.4實驗結(jié)果2.4.1載體構(gòu)建（1）組合過表達(dá)載體pY01和pY02....

本文編號：3909094