納他霉素作為一種安全高效的真菌抑制劑在食品產業(yè)和臨床中廣泛使用,但其工業(yè)生產水平仍有很大的上升空間。課題從工業(yè)生產菌恰塔努加鏈霉菌L10出發(fā),對生產菌進行重構,并基于合成體系對發(fā)酵環(huán)境的應答進行發(fā)酵工藝優(yōu)化研究,為大幅降低納他霉素生產成本提供基礎。本研究通過對合成體系定向改造,成功構建了穩(wěn)定的高產菌。通過erm E*p強啟動子對納他霉素生物合成過程中的四個限速酶—GDP-甘露糖脫水酶(Scn J)、氨基轉移酶(Scn C)、海藻糖胺轉移酶(Scn K)、細胞色素P450單加氧酶(Scn D)進行高表達,以及途徑特異性調控蛋白(Scn RII)、PKS輔基化蛋白—磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶(PPTase)進行了組合過表達,從而實現(xiàn)合成途徑限速酶、調控途徑、蛋白后修飾等的遺傳改造,重構了納他霉素合成生物體系(ZY01),發(fā)酵單位較出發(fā)菌株提高1.5倍。同時,我們完成了高產菌培養(yǎng)基與發(fā)酵工藝優(yōu)化,并成功進行了小試。首先通過碳氮源優(yōu)化,得到較優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基為黃豆餅粉15 g/L、酵母粉4.1 g/L、牛肉膏2.2 g/L、葡萄糖59 g/L,納他霉素效價達到5.435 g/L,較培養(yǎng)基優(yōu)化前提高了...

【文章頁數】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1納他霉素分子結構

浙江大學碩士論文第一章緒論2圖1.1納他霉素分子結構納他霉素屬于大環(huán)內酯聚酮類的多烯類，在非常低的濃度就具有較強的廣譜抑菌活性，因此被廣泛應用于食品工業(yè)，以防止奶酪和其他非無菌食品(如腌肉)受到霉菌污染。同時它是唯一被美國FDA認可為GRAS(一般認為是安全的)的抗真菌藥物，近5....

圖1.2納他霉素生物合成途徑[44]

浙江大學碩士論文第一章緒論4域（DH），分別負責將羰基還原成羥基以及脫去一個水分子從而將羥基轉變成雙鍵。因此經過這三個模塊的延伸后，聚酮鏈上形成了一個包含三個共軛雙鍵的發(fā)色基團。但由于模塊1不含有DH模塊，因此在第一步延伸時會在β碳位置上增加含一個羥基的兩碳單位。聚合酶PimS2....

圖1.3途徑特異性調控因子對納他霉素生物合成基因的調控模式圖[29]

浙江大學碩士論文第一章緒論7的轉錄，而scnRI則是通過調控scnRII達到間接調控簇內基因的結果[28]。圖1.3途徑特異性調控因子對納他霉素生物合成基因的調控模式圖[29]1.5.2全局性調控在納塔爾鏈霉菌中，無機磷酸鹽對納他霉素的生物合成特別敏感，濃度低至2mM足以大幅度降....

圖2.1海藻糖胺合成途徑

浙江大學碩士論文第二章納他霉素合成生物體系構建22（5）12000rpm室溫離心10min，收集有機相，用0.45μm有機膜過濾，進行高效液相檢測；（6）HPLC檢測條件見劉水平博士畢業(yè)論文（進樣量10μl）。2.4實驗結果2.4.1載體構建（1）組合過表達載體pY01和pY02....

本文編號：3909094