發(fā)布時(shí)間：2023-11-18 10:49

　　骨關(guān)節(jié)炎是一種關(guān)節(jié)軟骨的退行性疾病。諸多因素均可引起關(guān)節(jié)軟骨變性和丟失,繼而導(dǎo)致關(guān)節(jié)邊緣和軟骨下骨骨質(zhì)再生并引發(fā)滑膜炎癥。骨關(guān)節(jié)炎是常見(jiàn)的致殘疾病,發(fā)病率高,嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康和生活。尚無(wú)有效的方式治療骨關(guān)節(jié)炎,臨床上主要通過(guò)藥物治療(口服或關(guān)節(jié)腔注射)來(lái)緩解骨關(guān)節(jié)炎的癥狀,但并不能從根本上修復(fù)骨關(guān)節(jié)炎的軟骨損傷。目前,骨關(guān)節(jié)炎的基因治療受到了廣泛關(guān)注,其可以通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)而促進(jìn)軟骨修復(fù)。此外,與單一療法相比,聯(lián)合治療的方式可以起到增強(qiáng)療效的作用。因此,將基因和藥物聯(lián)合應(yīng)用來(lái)治療骨關(guān)節(jié)炎可為骨關(guān)節(jié)炎的治療提供新思路。氯諾昔康是一種新型的非甾體類(lèi)抗炎藥,主要通過(guò)發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用來(lái)治療骨關(guān)節(jié)炎。MicroRNA-140是一種小的非編碼RNA,可以通過(guò)調(diào)節(jié)與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因的表達(dá),從而促進(jìn)軟骨修復(fù)。將氯諾昔康和microRNA-140聯(lián)合應(yīng)用可達(dá)到消除炎癥和修復(fù)軟骨損傷的雙重目的。但microRNA難入胞且容易被核酸酶降解,仍需尋求合適的microRNA遞送載體來(lái)克服microRNA應(yīng)用的瓶頸。金納米粒是直徑為1～100nm的金的締合膠體,具有很多優(yōu)良的性質(zhì),是常用的基因遞送載體。...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
前言
第1章 AuNPs/miR-140復(fù)合物的制備及表征
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試藥
        1.2 儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 主要溶液的配制
            2.1.1 氯金酸溶液
            2.1.2 PEI溶液
            2.1.3 10×TAE電泳緩沖液
            2.1.4 MiR-140濃儲(chǔ)液
        2.2 AuNPs的制備
            2.2.1 AuNPs的初步制備方法
            2.2.2 PEI體積對(duì)AuNPs制備的影響
            2.2.3 反應(yīng)溫度對(duì)AuNPs制備的影響
            2.2.4 反應(yīng)時(shí)間對(duì)AuNPs制備的影響
        2.3 AuNPs的表征
            2.3.1 外觀性狀及微觀形態(tài)
            2.3.2 粒徑及電位分布
        2.4 AuNPs/miR-140復(fù)合物的制備
            2.4.1 復(fù)合物的制備
            2.4.2 復(fù)合物最佳質(zhì)量比(W/W=Au/miR-140)的篩選
                2.4.2.1 瓊脂糖凝膠阻滯電泳
                2.4.2.2 粒徑及電位分布
        2.5 金納米粒/miR-140復(fù)合物的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
            2.5.1 肝素提取實(shí)驗(yàn)
            2.5.2 復(fù)合物在RNA酶A中的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 AuNPs的制備
            3.1.1 PEI體積對(duì)AuNPs制備的影響
            3.1.2 反應(yīng)溫度對(duì)AuNPs制備的影響
            3.1.3 反應(yīng)時(shí)間對(duì)AuNPs制備的影響
        3.2 AuNPs的表征
            3.2.1 AuNPs的外觀性狀及微觀形態(tài)
            3.2.2 AuNPs的粒徑及電位分布
        3.3 AuNPs/miR-140復(fù)合物的最佳質(zhì)量比的篩選
            3.3.1 AuNPs/miR-140復(fù)合物的瓊脂糖凝膠阻滯電泳
            3.3.2 不同質(zhì)量比的AuNPs/miR-140復(fù)合物的粒徑及電位分布
        3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.4.1 肝素提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.4.2 復(fù)合物在RNA酶A中的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4. 討論
    5. 結(jié)論
第2章 AuNPs /miR-140復(fù)合物的體外評(píng)價(jià)
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試藥
        1.2 儀器
        1.3 細(xì)胞
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 主要溶液的配制
            2.1.1 MTT溶液
            2.1.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用磷酸鹽緩沖液(PBS)
        2.2 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
            2.3.1 熒光顯微鏡觀察
            2.3.2 流式細(xì)胞儀測(cè)定
        2.4 qPCR測(cè)定miR-140以及COL2A mRNA的相對(duì)表達(dá)
            2.4.1 總RNA的提取步驟
            2.4.2 MiR-140的逆轉(zhuǎn)錄步驟
            2.4.3 總RNA的逆轉(zhuǎn)錄步驟
            2.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)步驟
        2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    3. 結(jié)果與分析
        3.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.2.1 熒光顯微鏡觀察結(jié)果
            3.2.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果
        3.3 qPCR測(cè)定miR-140和COL2A mRNA的表達(dá)
            3.3.1 qPCR測(cè)定miR-140的表達(dá)
            3.3.2 qPCR測(cè)定COL2A mRNA的表達(dá)
    4. 討論
    5. 結(jié)論
第3章 Lnxc和miR-140聯(lián)合治療OA的藥效學(xué)研究
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試藥
        1.2 儀器
        1.3 動(dòng)物
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 主要溶液的配制
            2.1.1 1%木瓜蛋白酶和0.03M的半胱氨酸混合溶液
            2.1.2 Lnxc-sol
        2.2 大鼠膝關(guān)節(jié)OA模型的建立
        2.3 實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)
            2.3.1 分組
            2.3.2 給藥方案
        2.4 藥效學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)的觀察與測(cè)定
            2.4.1 軟骨的外觀觀察
            2.4.2 軟骨和滑膜的組織學(xué)評(píng)價(jià)
                2.4.2.1 股骨踝、脛骨平臺(tái)和滑膜等組織的處理
                2.4.2.2 HE染色
                2.4.2.3 番紅O-固綠染色
                2.4.2.4 軟骨和滑膜的組織病理學(xué)評(píng)分
        2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    3. 結(jié)果與分析
        3.1 大鼠體重和膝寬的測(cè)定結(jié)果
        3.2 大鼠股骨踝和脛骨平臺(tái)外觀觀察結(jié)果
        3.3 軟骨和滑膜的組織學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果
            3.3.1 股骨踝和脛骨平臺(tái)切片的HE染色結(jié)果
            3.3.2 滑膜切片的HE染色結(jié)果
            3.3.3 股骨踝和脛骨平臺(tái)切片的番紅O-固綠染色結(jié)果
        3.4 軟骨和滑膜的組織病理學(xué)評(píng)分
            3.4.1 股骨踝和脛骨平臺(tái)的Mankin評(píng)分
            3.4.2 滑膜的組織病理學(xué)評(píng)分
    4. 討論
    5. 結(jié)論
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3865137