拮抗酵母作為果實(shí)采后重要的生物防治拮抗微生物,在取代或降低化學(xué)殺菌劑使用量,保證人體及動(dòng)物健康、減小對(duì)環(huán)境污染等方面具有廣闊的前景。但目前普通的拮抗菌很難達(dá)到甚至接近化學(xué)殺菌劑的抑菌效果,利用遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)定向改造拮抗酵母可有效提高其生防效力。本論文以Rho1蛋白和Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1三種抗菌肽為研究對(duì)象,通過其分別在釀酒酵母和畢赤酵母GS115菌株中的穩(wěn)定遺傳及表達(dá);探究重組釀酒酵母rho1基因的過表達(dá)對(duì)CWI信號(hào)通路的影響以及對(duì)梨果實(shí)病害的防治效果,并揭示相關(guān)的抑菌機(jī)理;初步研究Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1三種抗菌肽重組畢赤酵母菌株的抑菌效果,同時(shí)對(duì)抗菌肽等外源基因轉(zhuǎn)化非常規(guī)酵母(羅倫隱球酵母)的可能性進(jìn)行探究。主要研究結(jié)論如下:1、重組釀酒酵母SC/rho1經(jīng)過半乳糖誘導(dǎo)培養(yǎng)后rho1基因能實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定高效表達(dá),同時(shí)對(duì)重組酵母細(xì)胞壁多糖組分分析顯示:半乳糖誘導(dǎo)后重組酵母葡聚糖和幾丁質(zhì)在細(xì)胞壁中含量較野生型酵母顯著上升,說明Rho1作為主調(diào)節(jié)因子,能顯著激活CWI信號(hào)通路中參與細(xì)胞壁合成和肌動(dòng)蛋白重排相關(guān)的基因(Pkc1、Fks1、Fks2、C...

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
簡寫詞對(duì)照表(Abbreviatiolls)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 前言
    1.2 微生物防治
        1.2.1 營養(yǎng)與空間競爭
        1.2.2 誘導(dǎo)果實(shí)產(chǎn)生抗性
        1.2.3 重寄生作用
        1.2.4 分泌胞外水解酶等活性物質(zhì)
    1.3 遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)定向改造酵母
    1.4 抗菌肽的研究進(jìn)展及概述
        1.4.1 抗菌肽的作用機(jī)理
        1.4.2 抗菌肽在病害防治中的應(yīng)用前景
    1.5 細(xì)胞壁完整性信號(hào)通路(CWI)和Rho1蛋白概述
        1.5.1 細(xì)胞壁完整性信號(hào)通路(CWI)
        1.5.2 Rho1蛋白功能
    1.6 本課題的研究意義及主要內(nèi)容
第二章 重組釀酒酵母rho1基因表達(dá)及其對(duì)CWI信號(hào)通路的影響
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 培養(yǎng)基與酵母菌株
        2.2.3 試驗(yàn)試劑
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 重組酵母SC/rho1誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.2 CWI信號(hào)通路相關(guān)基因檢測
        2.3.3 重組酵母細(xì)胞壁多糖組分分析
    2.4 討論
第三章 重組釀酒酵母SC/rho1的生防效力分析和抑菌機(jī)理初探
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試驗(yàn)儀器
        3.2.2 培養(yǎng)基與果實(shí)
        3.2.3 酵母菌株和病原真菌
        3.2.4 酵母細(xì)胞壁的制取
        3.2.5 試驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 活體重組酵母和滅活重組酵母對(duì)梨果實(shí)青霉病的直接抑制作用
        3.3.2 活體重組酵母和滅活重組酵母對(duì)梨果實(shí)青霉病的誘導(dǎo)抗性作用
        3.3.3 酵母果實(shí)傷口生長動(dòng)態(tài)
        3.3.4 酵母代謝產(chǎn)物對(duì)梨果實(shí)青霉病的抑制作用
        3.3.5 酵母細(xì)胞壁濃度對(duì)梨果實(shí)青霉病抗性的影響
        3.3.6 野生型與重組型酵母細(xì)胞壁誘導(dǎo)梨果實(shí)抗性的作用比較
        3.3.7 重組酵母對(duì)梨果實(shí)抗性相關(guān)基因表達(dá)的影響
    3.4 討論
第四章 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化
    4.1 前言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 試驗(yàn)儀器
        4.2.2 培養(yǎng)基
        4.2.3 菌株和質(zhì)粒
        4.2.4 試驗(yàn)試劑
        4.2.5 試驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1目的基因的優(yōu)化和合成
        4.3.2 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1目的基因檢測
        4.3.3 目的基因與pPICZα A表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.3.4 重組表達(dá)載體向畢赤酵母GS115的轉(zhuǎn)化
    4.4 小結(jié)
第五章 重組畢赤酵母GS115/Ace-AMP1、GS115/Ac-AMP2和GS115/MiAMP1抗菌肽的表達(dá)及抑菌效力評(píng)價(jià)
    5.1 前言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 試驗(yàn)儀器
        5.2.2 培養(yǎng)基與果實(shí)
        5.2.3 酵母菌株和病原菌
        5.2.4 試驗(yàn)方法
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 重組酵母抗菌肽基因檢測
        5.3.2 重組酵母抗菌肽Western-blot檢測
        5.3.3 重組酵母蛋白含量檢測
        5.3.4 抗菌肽對(duì)擴(kuò)展青霉體外抑制影響
        5.3.5 抗菌肽對(duì)梨果實(shí)青霉病的抑制作用
        5.3.6 抗菌肽重組酵母對(duì)梨果實(shí)青霉病的抑制作用
    5.4 討論
第六章 羅倫隱球酵母表達(dá)系統(tǒng)初探
    6.1 前言
    6.2 材料和方法
        6.2.1 試驗(yàn)儀器
        6.2.2 培養(yǎng)基
        6.2.3 菌株與質(zhì)粒
        6.2.4 試驗(yàn)試劑
        6.2.5 試驗(yàn)方法
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 GAP啟動(dòng)子和羅倫隱球酵母25S rDNA獲取
        6.3.2 GAP啟動(dòng)子和羅倫隱球酵母25S rDNA與載體構(gòu)建
        6.3.3 GAP啟動(dòng)子和羅倫隱球酵母25S rDNA表達(dá)載體的驗(yàn)證
    6.4 討論
第七章 結(jié)論與展望
    7.1 主要研究結(jié)論
    7.2 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    7.3 后續(xù)研究展望
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號(hào)：3860219