雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是衛(wèi)矛科雷公藤屬木質(zhì)藤本植物,具有資源豐富、殺蟲(chóng)活性高、廣譜、對(duì)哺乳動(dòng)物安全等優(yōu)點(diǎn)。雷公藤次堿是其主要?dú)⑾x(chóng)活性成分,具備開(kāi)發(fā)為高效安全新型生物農(nóng)藥的潛力。然而,雷公藤次堿的殺蟲(chóng)分子靶標(biāo)及作用機(jī)制至今尚不清楚。根據(jù)前期研究結(jié)果,推測(cè)雷公藤次堿作用于粘蟲(chóng)的肌肉系統(tǒng),對(duì)鈣離子通道及鈣信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)有顯著影響�；谝陨�,本研究以粘蟲(chóng)為研究對(duì)象,分別克隆了粘蟲(chóng)1,4,5-三磷酸肌醇受體(IP₃R)和質(zhì)膜鈣泵(PMCA)基因,并分析了兩種基因在粘蟲(chóng)中的時(shí)空表達(dá),同時(shí)利用RNAi技術(shù)驗(yàn)證了兩種鈣通道蛋白在雷公藤次堿殺蟲(chóng)作用中的功能,為進(jìn)一步闡明雷公藤次堿的殺蟲(chóng)作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1、利用反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(RT-PCR)分別克隆了粘蟲(chóng)IP₃R和PMCA基因序列,分別命名為Ms IP₃R和Ms PMCA。Ms IP₃R開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)8118 bp,編碼2076個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)其蛋白分子量和等電點(diǎn)分別為304784.46和...

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 昆蟲(chóng)的肌肉系統(tǒng)及肌肉毒劑
        1.1.1 昆蟲(chóng)肌肉系統(tǒng)組成及功能
        1.1.2 昆蟲(chóng)肌肉的收縮機(jī)制
        1.1.3 作用于昆蟲(chóng)肌肉的殺蟲(chóng)劑及其機(jī)理
    1.2 細(xì)胞的鈣離子調(diào)控
        1.2.1 鈣離子的功能
        1.2.2 三磷酸肌醇受體結(jié)構(gòu)及功能
        1.2.3 質(zhì)膜鈣ATP酶結(jié)構(gòu)及功能
    1.3 雷公藤生物堿殺蟲(chóng)作用研究進(jìn)展
        1.3.1 雷公藤生物堿主要化學(xué)組分
        1.3.2 雷公藤生物堿殺蟲(chóng)活性
        1.3.3 雷公藤生物堿殺蟲(chóng)作用機(jī)理研究進(jìn)展
    1.4 RNA干擾技術(shù)及應(yīng)用
        1.4.1 RNA干擾的本質(zhì)
        1.4.2 RNAi應(yīng)用及方法
    1.5 選題目的及意義
第二章 粘蟲(chóng)兩種目的基因克隆及序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 試驗(yàn)方法
        2.1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 粘蟲(chóng)IP₃R基因克隆及序列分析
        2.2.2 粘蟲(chóng)PMCA基因克隆及序列分析
    2.3 討論
        2.3.1 IP₃R在昆蟲(chóng)間具有高度同源性
        2.3.2 PMCA在昆蟲(chóng)間具有高度同源性
    2.4 小結(jié)
第三章 粘蟲(chóng)中兩種基因mRNA的表達(dá)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        3.1.2 試劑與儀器
        3.1.3 試驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 粘蟲(chóng)不同發(fā)育階段IP₃R基因的表達(dá)分析
        3.2.2 粘蟲(chóng)不同組織中IP₃R基因的表達(dá)分析
        3.2.3 粘蟲(chóng)不同發(fā)育階段PMCA基因的表達(dá)分析
        3.2.4 粘蟲(chóng)不同組織中PMCA基因的表達(dá)分析
    3.3 討論
        3.3.1 IP₃R在不同物種中表達(dá)分布的差異性與功能相關(guān)
        3.3.2 PMCA在不同物種內(nèi)時(shí)空表達(dá)的差異性與功能相關(guān)
    3.4 小結(jié)
第四章 RNAi處理試蟲(chóng)對(duì)雷公藤次堿敏感性的變化
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        4.1.2 試劑與儀器
        4.1.3 試驗(yàn)方法
        4.1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 粘蟲(chóng)IP₃R基因在雷公藤次堿殺蟲(chóng)作用中的功能鑒定
        4.2.2 粘蟲(chóng)PMCA基因在雷公藤次堿殺蟲(chóng)作用中的功能鑒定
    4.3 討論
        4.3.1 雷公藤次堿對(duì)IP3R無(wú)明顯影響
        4.3.2 雷公藤次堿可作用于PMCA
    4.4 小結(jié)
第五章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 IP₃R不是雷公藤次堿的殺蟲(chóng)靶標(biāo)
        5.1.2 PMCA可能是雷公藤次堿的分子靶標(biāo)
    5.2 主要結(jié)論
    5.3 本研究創(chuàng)新點(diǎn)
    5.4 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄A 粘蟲(chóng)IP₃R基因開(kāi)放閱讀框序列
    附錄B 粘蟲(chóng)IP₃R氨基酸序列
    附錄C 粘蟲(chóng)IP₃R氨基酸多重序列比較
    附錄D 粘蟲(chóng)PMCA基因開(kāi)放閱讀框序列
    附錄E 粘蟲(chóng)PMCA氨基酸序列
    附錄F 粘蟲(chóng)PMCA氨基酸多重序列比較
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3846070