多肽類抗氧化劑由于其抗氧化效率遠遠高于非多肽類抗氧化劑而成為具有廣泛應(yīng)用價值的抗氧化活性成份,但是活性多肽和多數(shù)活性蛋白一樣往往在高溫等極端應(yīng)用環(huán)境下不夠穩(wěn)定,這已成為制約其在化妝品、保健品及藥品中廣泛應(yīng)用的最主要因素。本項目通過酶解法及高溫篩選,從酪蛋白中獲得能夠在高溫下保持良好抗氧化活力的穩(wěn)定性生物活性肽,并對其生理功能及結(jié)構(gòu)組成進行分析,為抗氧化肽功能特性的發(fā)掘及溫度耐受機制的研究提供參考,也為功能性食品的開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:1、采用單因素及正交試驗,以超氧陰離子自由基、DPPH·自由基及羥自由基清除能力為檢測指標,對酪蛋白水解條件進行優(yōu)化,在底物濃度10%、55℃、pH 6.5、反應(yīng)時間4 h、酶用量35μL的條件獲得了抗氧化活性較高的蛋白水解產(chǎn)物。2、確定了耐高溫抗氧化多肽的篩選條件。對優(yōu)化水解條件所得抗氧化活性較高的水解產(chǎn)物進行70、80、90、100℃高溫篩選,以3種自由基清除能力為指標,確定水解組合A₃B₂C₁D₃在100℃處理25 min后,得到具有良好溫度耐受性及抗氧...

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 乳蛋白研究進展
        1.1.1 乳蛋白的成分構(gòu)成及結(jié)構(gòu)特征
        1.1.2 乳蛋白水解物活性成分相關(guān)研究
    1.2 蛋白水解產(chǎn)生抗氧化肽的相關(guān)研究進展
        1.2.1 抗氧化肽的來源
        1.2.2 抗氧化肽的制備工藝
        1.2.3 抗氧化肽的抗氧化活性測定方法
        1.2.4 抗氧化肽的分離純化技術(shù)
        1.2.5 抗氧化肽的組成及結(jié)構(gòu)鑒定方法
        1.2.6 抗氧化肽的生理功能研究
        1.2.7 抗氧化肽的穩(wěn)定性研究
        1.2.8 抗氧化肽的開發(fā)應(yīng)用
    1.3 熱穩(wěn)定性蛋白研究進展
    1.4 研究思路和研究內(nèi)容
        1.4.1 研究思路
        1.4.2 研究主要內(nèi)容
        1.4.3 技術(shù)線路圖
第二章 酪蛋白水解產(chǎn)生抗氧化多肽的工藝研究
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 儀器與設(shè)備
        2.2.3 實驗方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 酪蛋白酶解反應(yīng)最優(yōu)酶選擇
        2.3.2 水解條件優(yōu)化
        2.3.3 正交試驗及抗氧化活性綜合分析
        2.3.4 驗證實驗
    2.4 討論
第三章 蛋白水解液中熱穩(wěn)定性抗氧化多肽誘導(dǎo)篩選
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 儀器與設(shè)備
        3.2.3 實驗方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 耐高溫多肽預(yù)篩選
        3.3.2 高溫處理條件確定
        3.3.3 三氯乙酸除蛋白后抗氧化能力分析
        3.3.4 耐高溫抗氧化多肽穩(wěn)定性評價
    3.4 討論
第四章 熱穩(wěn)定性抗氧化多肽液相色譜分析
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 儀器與設(shè)備
        4.2.3 實驗方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 酪蛋白水解物RP-HPLC波長選擇
        4.3.2 酪蛋白水解物RP-HPLC洗脫程序選擇
        4.3.3 酪蛋白水解物RP-HPLC方法重復(fù)性分析
        4.3.4 高溫處理對酪蛋白水解物液相色譜分析
    4.4 討論
第五章 熱穩(wěn)定性抗氧化多肽生理功能驗證
    5.1 引言
    5.2 實驗試劑及儀器
        5.2.1 主要試劑
        5.2.2 儀器與設(shè)備
        5.2.3 實驗方法
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 H₂O₂ 誘導(dǎo)HUVE細胞損傷模型的建立
        5.3.2 耐高溫抗氧化多肽對HUVE細胞毒性分析
        5.3.3 耐高溫抗氧化多肽對H₂O₂ 誘導(dǎo)的HUVE細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用
        5.3.4 細胞形態(tài)觀察
        5.3.5 耐高溫抗氧化多肽對H₂O₂ 誘導(dǎo)損傷的HUVE細胞胞外乳酸脫氫酶影響
        5.3.6 耐高溫抗氧化多肽對H₂O₂ 誘導(dǎo)損傷的HUVE細胞氧化還原酶系影響
        5.3.7 耐高溫抗氧化多肽預(yù)處理對Caspase-3 蛋白表達的影響
    5.4 討論
第六章 熱穩(wěn)定性抗氧化多肽分離純化
    6.1 引言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 材料
        6.2.2 儀器與設(shè)備
        6.2.3 實驗方法
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 葡聚糖凝膠層析分離多肽結(jié)果
        6.3.2 離子交換色譜法分離多肽結(jié)果
        6.3.3 分離純化多肽的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析
    6.4 討論
第七章 熱穩(wěn)定性抗氧化多肽生物信息學(xué)分析
    7.1 引言
    7.2 材料與方法
        7.2.1 材料
        7.2.2 儀器與設(shè)備
        7.2.3 實驗方法
    7.3 結(jié)果與分析
        7.3.1 樣品多肽質(zhì)譜鑒定結(jié)果分析
        7.3.2 耐高溫抗氧化多肽的篩選及功能注釋
        7.3.3 耐高溫抗氧化多肽的氨基酸組成及相關(guān)理化性質(zhì)分析
        7.3.4 耐高溫抗氧化多肽疏水性分析
        7.3.5 耐高溫抗氧化多肽信號肽預(yù)測
        7.3.6 耐高溫抗氧化多肽二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
    7.4 討論
第八章 總結(jié)與展望
    8.1 研究結(jié)論
    8.2 展望
參考文獻
研究生期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3834061