發(fā)布時(shí)間：2023-06-10 13:05

　　商業(yè)化芽孢桿菌益生菌制劑常以孢子的形式為主。本論文通過(guò)比較收集的不同商用芽孢桿菌菌株的生物學(xué)特性,得到一株性狀優(yōu)良的菌株,以該菌株為例,構(gòu)建了快速準(zhǔn)確且靈敏度高的芽孢桿菌芽孢體的特異性檢測(cè)方法,并將該方法應(yīng)用于芽孢桿菌液態(tài)發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵的優(yōu)化設(shè)計(jì),從而為益生芽孢桿菌的發(fā)酵生產(chǎn)提供一種通用的快速評(píng)價(jià)和生產(chǎn)制備方法。研究?jī)?nèi)容及相關(guān)結(jié)果如下:(1)收集整理了15種市場(chǎng)上藥用和飼用的益生芽孢桿菌相關(guān)產(chǎn)品,對(duì)其使用的芽孢桿菌進(jìn)行分離鑒定,分別從產(chǎn)淀粉酶、纖維素酶和蛋白酶等酶活測(cè)試、抗菌活性、耐酸和耐膽鹽穩(wěn)定性、抗生素敏感性以及耗氧及生長(zhǎng)速率測(cè)試等方面對(duì)15株芽孢桿菌的菌株特性進(jìn)行了比較研究。(2)在實(shí)驗(yàn)室前期研究基礎(chǔ)上,即根據(jù)芽孢在高溫高壓下釋放出的2,6-吡啶二羧酸(DPA)與Eu²⁺和螯合劑CyDTA形成的熒光復(fù)合物的熒光特性來(lái)實(shí)現(xiàn)芽孢的快速定量測(cè)定,以分離出的出發(fā)菌株為對(duì)象,建立菌株芽孢濃度(CFU/mL)及相應(yīng)熒光強(qiáng)度之間的線性關(guān)系。(3)基于DPA熒光強(qiáng)度檢測(cè)芽孢濃度方法,本試驗(yàn)進(jìn)一步探討該方法在優(yōu)化芽孢菌株液態(tài)發(fā)酵孢子產(chǎn)量的可行性。以樣品中孢子DPA熒光強(qiáng)度為響...

【文章頁(yè)數(shù)】：117 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 益生菌
    1.2 益生芽孢桿菌
        1.2.1 芽孢桿菌
        1.2.2 益生芽孢桿菌研究進(jìn)展
        1.2.3 常見(jiàn)益生芽孢桿菌制劑及作用機(jī)制
    1.3 芽孢桿菌的生產(chǎn)制備
    1.4 芽孢桿菌芽孢體的檢測(cè)
        1.4.1 常規(guī)檢測(cè)法
        1.4.2 特異性檢測(cè)法
    1.5 研究目的和意義
第二章 幾種商用益生芽孢菌株特性的比較研究
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株及培養(yǎng)基
        2.2.2 試劑與儀器
        2.2.3 芽孢桿菌的分離純化
        2.2.4 芽孢桿菌的16SrDNA分子鑒定
        2.2.5 芽孢懸液及營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞的制備
        2.2.6 益生特性測(cè)定
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 芽孢桿菌的分離與鑒定
        2.3.2 產(chǎn)酶能力的比較
        2.3.3 抗菌活性的比較
        2.3.4 分離出的芽孢桿菌菌株穩(wěn)定性比較
        2.3.5 各菌株抗生素敏感性測(cè)試
        2.3.6 優(yōu)勢(shì)菌株生長(zhǎng)與耗氧速率的比較
    2.4 小結(jié)
第三章 基于DPA水平的B.amylolyquefaciensBS-20芽孢體的檢測(cè)方法研究
    3.1 前言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株及培養(yǎng)基
        3.2.2 試劑與材料
        3.2.3 芽孢懸液的制備
        3.2.4 基于DPA特異性檢測(cè)芽孢桿菌芽孢體活菌濃度
        3.2.5 芽孢活菌濃度與釋放DPA熒光強(qiáng)度關(guān)系
        3.2.6 檢測(cè)方法的驗(yàn)證
        3.2.7 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 DPA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特異性測(cè)定
        3.3.2 芽孢活菌濃度與釋放DPA熒光強(qiáng)度關(guān)系
        3.3.3 基于DPA熒光計(jì)數(shù)法檢測(cè)芽孢體濃度方法的驗(yàn)證
    3.4 小結(jié)
第四章 基于DPA熒光計(jì)數(shù)法對(duì)B.amylolyquefaciensBS-20液態(tài)發(fā)酵的快速優(yōu)化及孢子回收的研究
    4.1 前言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株及培養(yǎng)基
        4.2.2 試劑與材料
        4.2.3 發(fā)酵樣品取樣時(shí)間節(jié)點(diǎn)的確定
        4.2.4 碳、氮源及C/N對(duì)芽孢桿菌活菌濃度的影響
        4.2.5 無(wú)機(jī)金屬離子的選擇及最優(yōu)組合的確定
        4.2.6 工業(yè)原料的選擇及最優(yōu)組合的確定
        4.2.7 培養(yǎng)條件對(duì)芽孢桿菌芽孢體活菌濃度的影響
        4.2.8 優(yōu)化驗(yàn)證
        4.2.9 絮凝法回收B.amylolyquefaciensBS-20發(fā)酵液中的菌體
        4.2.10 芽孢的處理和測(cè)定方法
        4.2.11 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 發(fā)酵樣品取樣時(shí)間節(jié)點(diǎn)的確定
        4.3.2 碳、氮源及C/N對(duì)菌體積累的影響
        4.3.3 葡萄糖濃度對(duì)產(chǎn)孢的影響
        4.3.4 無(wú)機(jī)金屬離子的選擇及其最佳組合濃度的確定
        4.3.5 工業(yè)原料的選擇及最佳組合的確定
        4.3.6 培養(yǎng)條件對(duì)孢子濃度的影響
        4.3.7 基于DPA熒光計(jì)數(shù)法對(duì)液態(tài)發(fā)酵的優(yōu)化驗(yàn)證
        4.3.8 發(fā)酵液pH值及殼聚糖終濃度對(duì)絮凝效果的影響
        4.3.9 不同CTS和ZnSO4配比對(duì)絮凝效果的影響
        4.3.10 CTS和CTS-Zn紅外掃描、活性驗(yàn)證及濃縮率計(jì)算
    4.4 小結(jié)
第五章 基于DPA熒光計(jì)數(shù)法對(duì)B.amylolyquefaciensBS-20純種固態(tài)發(fā)酵的快速優(yōu)化及代謝活性的研究
    5.1 前言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株及培養(yǎng)基
        5.2.2 試劑與材料
        5.2.3 固體基質(zhì)配比優(yōu)化
        5.2.4 營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)優(yōu)化
        5.2.5 最適培養(yǎng)條件篩選
        5.2.6 優(yōu)化方法的驗(yàn)證
        5.2.7 固態(tài)發(fā)酵進(jìn)程曲線及代謝終產(chǎn)物活性的測(cè)定
        5.2.8 固態(tài)發(fā)酵代謝活性物質(zhì)的測(cè)定方法
        5.2.9 芽孢的處理和測(cè)定方法
        5.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 固體基質(zhì)配比的優(yōu)化
        5.3.2 營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)單因素篩選
        5.3.3 營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)最優(yōu)組合的確定
        5.3.4 固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化
        5.3.5 優(yōu)化方法的驗(yàn)證
        5.3.6 活性物質(zhì)的測(cè)定及發(fā)酵進(jìn)程的探究
    5.4 小結(jié)
第六章 基于B.amylolyquefaciensBS-20復(fù)合固態(tài)發(fā)酵的研究
    6.1 前言
    6.2 材料和方法
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株及培養(yǎng)基
        6.2.2 試劑與材料
        6.2.3 復(fù)合固態(tài)發(fā)酵各菌株菌液配比及組合
        6.2.4 發(fā)酵后樣品的處理和測(cè)定
        6.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    6.3 結(jié)果與討論
    6.4 小結(jié)
結(jié)論及展望
參考文獻(xiàn)
附錄 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3832932