近年來隨著我國人口老齡化、生產(chǎn)工業(yè)化帶來環(huán)境污染、城市化進(jìn)程加快帶來生活習(xí)慣的改變等因素,人們的腫瘤患病率和死亡率明顯提高。腫瘤的預(yù)防、治療,以及相關(guān)的藥物研發(fā),得到越來越多的科研團(tuán)隊(duì)的重視。阿霉素(Doxorubicin,簡稱為Dox)是一種廣譜、有效的抗癌藥物,但對心臟、肝臟、骨髓等有較強(qiáng)的毒副作用。為此,科學(xué)家們提出了很多解決辦法,利用藥物載體是較有潛力的策略之一。多種細(xì)胞表面存在著細(xì)胞表面囊泡(Cell-bound membrane vesicles,簡稱為CBMVs)。本課題組前期對細(xì)胞表面囊泡進(jìn)行了較多的研究,例如對囊泡的鑒定、特性表征、運(yùn)動規(guī)律等,并已對該種囊泡的分離和純化做了初步探索。在此基礎(chǔ)上,我們推測,細(xì)胞表面囊泡也許可作為一種潛在的抗腫瘤藥物的載體系統(tǒng),來解決阿霉素的毒副作用等問題。為了驗(yàn)證這個推測,本課題使用去污劑處理和蔗糖梯度高速離心法從體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)表面分離、純化了細(xì)胞表面囊泡,通過聲波降解法裝載阿霉素,得到阿霉素-細(xì)胞表面囊泡(簡稱阿霉素-囊泡;其包封率和載藥量分別為44.77%±2.71%和2.36%±0.05%)。使用共聚焦...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 癌癥
    1.2 結(jié)腸癌
    1.3 阿霉素
    1.4 納米藥物載體用于腫瘤的檢測及治療
    1.5 細(xì)胞表面囊泡
    1.6 本課題的研究目的、內(nèi)容和意義
第2章 囊泡的提取、載藥及鑒定
    2.1 材料與設(shè)備
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.1.3 細(xì)胞
        2.1.4 主要試劑配制
            2.1.4.1 PBS緩沖溶液
            2.1.4.2 HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)液
            2.1.4.3 磷鎢酸溶液
            2.1.4.4 高效液相色譜的流動相配制
            2.1.4.5 Triton X-100溶液的配制
            2.1.4.6 10%的蔗糖溶液
            2.1.4.7 透析袋處理
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC的培養(yǎng)
            2.2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.2.1.2 細(xì)胞傳代
            2.2.1.3 細(xì)胞凍存
        2.2.2 囊泡的提取
        2.2.3 囊泡計(jì)數(shù)
        2.2.4 囊泡載藥
        2.2.5 囊泡載藥的激光共聚焦顯微鏡觀察
        2.2.6 粒徑和Zeta電位的檢測
        2.2.7 透射電子顯微鏡的檢測
        2.2.8 藥物體外釋放檢測
        2.2.9 包封率、載藥量的檢測
        2.2.10 囊泡來源檢測
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 囊泡的計(jì)數(shù)
        2.3.2 囊泡載藥的激光共聚焦顯微鏡觀察
        2.3.3 粒徑和Zeta電位結(jié)果
        2.3.4 囊泡的形貌、大小
        2.3.5 體外釋放
        2.3.6 包封率和載藥量
        2.3.7 囊泡來源的檢測
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 囊泡載藥藥效的初步檢測
    3.1 材料與設(shè)備
        3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        3.1.3 細(xì)胞
        3.1.4 小鼠
        3.1.5 主要試劑配制
            3.1.5.1 PBS緩沖溶液
            3.1.5.2 細(xì)胞培養(yǎng)液
            3.1.5.3 MTT溶液
            3.1.5.4 5% BSA封閉液
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)
        3.2.3 細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 小鼠結(jié)腸癌腫瘤模型的建立、給藥
        3.2.5 藥物堆積
        3.2.6 石蠟切片
        3.2.7 血液檢測
        3.2.8 HE染色
        3.2.9 免疫組化
        3.2.10 TUNEL法檢測組織內(nèi)細(xì)胞凋亡
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 阿霉素-囊泡的細(xì)胞識別和內(nèi)吞
        3.3.2 阿霉素-囊泡的體外腫瘤細(xì)胞殺傷效果
        3.3.3 小鼠體重
        3.3.4 阿霉素-囊泡對小鼠體內(nèi)腫瘤生長的抑制效果
        3.3.5 藥物堆積實(shí)驗(yàn)顯示阿霉素-囊泡的緩釋效果
        3.3.6 阿霉素-囊泡能夠減輕阿霉素的毒副作用
        3.3.7 組織切片HE染色顯示阿霉素-囊泡的抗腫瘤作用
        3.3.8 磷酸化組蛋白的熒光免疫組化展示阿霉素-囊泡對腫瘤細(xì)胞分裂的抑制作用
        3.3.9 TUNEL法檢測阿霉素-囊泡對小鼠腫瘤組織內(nèi)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 總結(jié)和展望
    4.1 總結(jié)
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號：3821498