雄烯二酮(簡(jiǎn)稱AD),是一類內(nèi)源性類固醇激素,可由人體性腺及腎上腺分泌,是體內(nèi)雄性激素合成途徑中睪酮的直接前體,也是雌性激素合成途徑中雌激素的前體。它在合理控制雄激素和雌激素的平衡中起到至關(guān)重要的作用。另外,AD還是甾體藥物合成的重要中間體,通過(guò)AD幾乎可以合成所有的甾體藥物。本文首先對(duì)AD種子培養(yǎng)基配方進(jìn)行了優(yōu)化。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)、正交實(shí)驗(yàn),得到最適的種子培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)時(shí)間。其次針對(duì)植物甾醇疏水性的問(wèn)題,研究了有機(jī)溶劑、深共熔試劑、表面活性劑、環(huán)糊精等助溶劑和兩相體系對(duì)發(fā)酵產(chǎn)AD的影響,確定兩相體系發(fā)酵的產(chǎn)率最高。然后選擇正交實(shí)驗(yàn)對(duì)兩相體系發(fā)酵進(jìn)行優(yōu)化,當(dāng)植物甾醇濃度為10 g/L,有機(jī)相為大豆油、所占比例為16%,AD產(chǎn)率最高為42.15%(w/w),此時(shí)AD濃度為2.83 g/L。接下來(lái)探究了搖瓶溫度、轉(zhuǎn)速、裝液量、接種量、初始p H值、培養(yǎng)時(shí)間等發(fā)酵條件對(duì)產(chǎn)AD的影響。優(yōu)化后的發(fā)酵條件為:溫度為30℃、初始p H值8.0、轉(zhuǎn)速200 rpm、接種量20%、裝液量150 m L,發(fā)酵6天后AD產(chǎn)率達(dá)50.37%(w/w),AD濃度為3.39 g/L,底物轉(zhuǎn)化率為76.42%(w/...

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 緒論
    1.1 甾體化合物的概述
    1.2 植物甾醇和雄烯二酮的概述
        1.2.1 植物甾醇的簡(jiǎn)介
        1.2.2 雄烯二酮的簡(jiǎn)介
    1.3 AD的生產(chǎn)方法
        1.3.1 化學(xué)合成法
        1.3.2 微生物轉(zhuǎn)化法
    1.4 研究背景
        1.4.1 微生物發(fā)酵生產(chǎn)AD菌種選育
        1.4.2 AD發(fā)酵工藝條件研究
        1.4.3 游離細(xì)胞轉(zhuǎn)化技術(shù)
    1.5 研究意義
    1.6 主要研究?jī)?nèi)容
2 雄烯二酮發(fā)酵工藝條件研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌株
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)方法
        2.1.5 底物和產(chǎn)物的檢測(cè)方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 種子培養(yǎng)基成分的優(yōu)化
        2.2.2 菌體生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.2.3 助溶劑對(duì)發(fā)酵結(jié)果的影響
        2.2.4 搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化
    2.3 結(jié)果和討論
        2.3.1 種子培養(yǎng)基的優(yōu)化
        2.3.2 菌體的生長(zhǎng)曲線
        2.3.3 助溶劑對(duì)發(fā)酵結(jié)果的影響
        2.3.4 搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化
    2.4 本章小結(jié)
3 游離細(xì)胞法轉(zhuǎn)化植物甾醇生成雄烯二酮工藝條件研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 菌種和培養(yǎng)基
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 游離細(xì)胞的收集
        3.1.5 底物和產(chǎn)物的檢測(cè)方法
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 助溶劑的選擇
        3.2.2 游離細(xì)胞法生成AD工藝優(yōu)化
        3.2.3 反復(fù)分批轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 助溶劑的選擇
        3.3.2 游離細(xì)胞法生成AD工藝優(yōu)化
        3.3.3 反復(fù)分批轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)
    3.4 本章小結(jié)
4 雄烯二酮分離提取的初步研究
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 除去菌體
        4.2.2 萃取
        4.2.3 活性炭脫色
        4.2.4 低溫結(jié)晶
        4.2.5 產(chǎn)品純度分析
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 除去轉(zhuǎn)化液含的菌體
        4.3.2 萃取條件對(duì)萃取效果的影響
        4.3.3 活性炭脫色的研究
        4.3.4 AD產(chǎn)品的結(jié)晶
        4.3.5 產(chǎn)品純度分析
    4.4 本章小結(jié)
5 討論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)成果目錄
致謝



本文編號(hào)：3804994