【目的】流感每年給人類的健康和經(jīng)濟(jì)造成巨大損害,而接種流感疫苗是預(yù)防流感行之有效的方法。在短期內(nèi)快速高效的生產(chǎn)疫苗,對生產(chǎn)制造商來說是一個挑戰(zhàn)。因此,需要一套經(jīng)濟(jì)高效的流感疫苗生產(chǎn)工藝來支撐龐大的疫苗需求。傳統(tǒng)流感疫苗主要借助于雞胚生產(chǎn),具有多種局限性,例如雞胚供應(yīng)可能受到流感大流行的影響。細(xì)胞基質(zhì)流感疫苗逐漸成為近些年的研發(fā)熱點(diǎn),國外已有部分企業(yè)上市了此種疫苗。本研究通過對比不同的細(xì)胞基質(zhì)流感疫苗的純化工藝以及對純化工藝進(jìn)行優(yōu)化,進(jìn)而獲得純度較高的細(xì)胞基質(zhì)疫苗原液�！痉椒ā緽V69流感病毒經(jīng)過深層過濾、核酸酶處理和超濾后,經(jīng)過一步層析,對Sepharose 4FF、Capto core 700以及Cellufine sulfate的純化條件進(jìn)行優(yōu)化,對收獲的病毒液進(jìn)行滅活以及滅活驗證,將滅活后的病毒液進(jìn)行二步層析,包括Capto Q和Q Sepharose xl的純化條件優(yōu)化。鑒于考慮實(shí)際生產(chǎn)的成本和效率問題,在保證病毒回收率的前提下,最終初步選擇Capto core 700和Capto Q相結(jié)合的兩步層析法作為BV69、H1N1、BY、H3N2的純化選擇�！窘Y(jié)果】以BY病毒的純化為...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 流感病毒的結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)特性
        1.1.2 流感病毒的流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)
        1.1.3 流感疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀
    1.2 研究目的及意義
    1.3 技術(shù)路線
第二章 MDCK細(xì)胞基質(zhì)流感病毒的純化
    2.1 實(shí)驗材料
        2.1.1 細(xì)胞、毒株和標(biāo)準(zhǔn)品
        2.1.2 主要實(shí)驗設(shè)備和儀器
        2.1.3 主要實(shí)驗試劑
    2.2 基本實(shí)驗操作與溶液配制
        2.2.1 主要實(shí)驗溶液的配制
        2.2.2 基本實(shí)驗操作
            2.2.2.1 血凝實(shí)驗
            2.2.2.2 Lowry法測總蛋白
            2.2.2.3 單向擴(kuò)散免疫法測HA
            2.2.2.4 MDCK宿主蛋白檢測試劑盒測殘余MDCK蛋白含量
            2.2.2.5 MDCK宿主DNA檢測試劑盒測殘余DNA含量
    2.3 實(shí)驗方法
        2.3.1 病毒收獲液初步澄清的方式選擇
        2.3.2 Benzonse核酸酶處理條件優(yōu)化
        2.3.3 超濾膜包的孔徑選擇(緩沖液為0.01MPB+0.1M NaCl)
        2.3.4 超濾的緩沖鹽濃度的選擇(300KD膜包)
        2.3.5 層析條件的摸索
            2.3.5.1 裝柱
            2.3.5.2 分子篩填料(Sepharose4FF、6FF)使用條件摸索
            2.3.5.3 復(fù)合填料Capto Core700 使用條件的摸索
            2.3.5.4 親和層析填料Cellufine Sulfate使用條件摸索
        2.3.6 流感病毒的滅活
            2.3.6.1 初次接種
            2.3.6.2 初次接種24小時檢胚
            2.3.6.3 冷胚處理
            2.3.6.4 盲傳一代
            2.3.6.5 盲傳一代24小時檢胚
            2.3.6.6 血凝試驗
            2.3.6.7 結(jié)果判定
        2.3.7 二步層析Capto Q、Q Sepharose xl使用條件摸索
            2.3.7.1 BV69 流感病毒樣在Capto Q、Q Sepharose xl進(jìn)行層析
            2.3.7.2 H1N1 流感病毒樣在Capto Q上進(jìn)行層析
            2.3.7.3 BY流感病毒樣在Capto Q上進(jìn)行層析
            2.3.7.4 H3N2 流感病毒樣在Capto Q上進(jìn)行層析
    2.4 實(shí)驗結(jié)果
        2.4.1 病毒收獲液初步澄清的方式選擇
        2.4.2 核酸酶處理的條件
        2.4.3 超濾膜包的孔徑選擇
        2.4.4 超濾的緩沖鹽濃度的選擇
        2.4.5 一步層析條件的摸索
            2.4.5.1 分子篩填料(Sepharose4FF、6FF)使用條件摸索
            2.4.5.2 復(fù)合填料Capto Core700 使用條件摸索
            2.4.5.3 親和層析填料Cellufine Sulfate使用條件摸索
            2.4.5.4 滅活及滅活驗證
            2.4.5.5 一步層析小結(jié)
        2.4.6 二步層次使用條件摸索
    2.5 總結(jié)與討論
        2.5.1 總結(jié)
        2.5.2 討論
        2.5.3 展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3784533