發(fā)布時間：2023-04-06 22:28

　　【目的】流感每年給人類的健康和經濟造成巨大損害,而接種流感疫苗是預防流感行之有效的方法。在短期內快速高效的生產疫苗,對生產制造商來說是一個挑戰(zhàn)。因此,需要一套經濟高效的流感疫苗生產工藝來支撐龐大的疫苗需求。傳統(tǒng)流感疫苗主要借助于雞胚生產,具有多種局限性,例如雞胚供應可能受到流感大流行的影響。細胞基質流感疫苗逐漸成為近些年的研發(fā)熱點,國外已有部分企業(yè)上市了此種疫苗。本研究通過對比不同的細胞基質流感疫苗的純化工藝以及對純化工藝進行優(yōu)化,進而獲得純度較高的細胞基質疫苗原液�！痉椒ā緽V69流感病毒經過深層過濾、核酸酶處理和超濾后,經過一步層析,對Sepharose 4FF、Capto core 700以及Cellufine sulfate的純化條件進行優(yōu)化,對收獲的病毒液進行滅活以及滅活驗證,將滅活后的病毒液進行二步層析,包括Capto Q和Q Sepharose xl的純化條件優(yōu)化。鑒于考慮實際生產的成本和效率問題,在保證病毒回收率的前提下,最終初步選擇Capto core 700和Capto Q相結合的兩步層析法作為BV69、H1N1、BY、H3N2的純化選擇。【結果】以BY病毒的純化為...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 流感病毒的結構及其生物學特性
        1.1.2 流感病毒的流行病學和臨床表現(xiàn)
        1.1.3 流感疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀
    1.2 研究目的及意義
    1.3 技術路線
第二章 MDCK細胞基質流感病毒的純化
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞、毒株和標準品
        2.1.2 主要實驗設備和儀器
        2.1.3 主要實驗試劑
    2.2 基本實驗操作與溶液配制
        2.2.1 主要實驗溶液的配制
        2.2.2 基本實驗操作
            2.2.2.1 血凝實驗
            2.2.2.2 Lowry法測總蛋白
            2.2.2.3 單向擴散免疫法測HA
            2.2.2.4 MDCK宿主蛋白檢測試劑盒測殘余MDCK蛋白含量
            2.2.2.5 MDCK宿主DNA檢測試劑盒測殘余DNA含量
    2.3 實驗方法
        2.3.1 病毒收獲液初步澄清的方式選擇
        2.3.2 Benzonse核酸酶處理條件優(yōu)化
        2.3.3 超濾膜包的孔徑選擇(緩沖液為0.01MPB+0.1M NaCl)
        2.3.4 超濾的緩沖鹽濃度的選擇(300KD膜包)
        2.3.5 層析條件的摸索
            2.3.5.1 裝柱
            2.3.5.2 分子篩填料(Sepharose4FF、6FF)使用條件摸索
            2.3.5.3 復合填料Capto Core700 使用條件的摸索
            2.3.5.4 親和層析填料Cellufine Sulfate使用條件摸索
        2.3.6 流感病毒的滅活
            2.3.6.1 初次接種
            2.3.6.2 初次接種24小時檢胚
            2.3.6.3 冷胚處理
            2.3.6.4 盲傳一代
            2.3.6.5 盲傳一代24小時檢胚
            2.3.6.6 血凝試驗
            2.3.6.7 結果判定
        2.3.7 二步層析Capto Q、Q Sepharose xl使用條件摸索
            2.3.7.1 BV69 流感病毒樣在Capto Q、Q Sepharose xl進行層析
            2.3.7.2 H1N1 流感病毒樣在Capto Q上進行層析
            2.3.7.3 BY流感病毒樣在Capto Q上進行層析
            2.3.7.4 H3N2 流感病毒樣在Capto Q上進行層析
    2.4 實驗結果
        2.4.1 病毒收獲液初步澄清的方式選擇
        2.4.2 核酸酶處理的條件
        2.4.3 超濾膜包的孔徑選擇
        2.4.4 超濾的緩沖鹽濃度的選擇
        2.4.5 一步層析條件的摸索
            2.4.5.1 分子篩填料(Sepharose4FF、6FF)使用條件摸索
            2.4.5.2 復合填料Capto Core700 使用條件摸索
            2.4.5.3 親和層析填料Cellufine Sulfate使用條件摸索
            2.4.5.4 滅活及滅活驗證
            2.4.5.5 一步層析小結
        2.4.6 二步層次使用條件摸索
    2.5 總結與討論
        2.5.1 總結
        2.5.2 討論
        2.5.3 展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：3784533