發(fā)布時(shí)間：2023-03-05 01:51

　　高血壓是導(dǎo)致心腦血管疾病的重要誘因,已經(jīng)成為了全球性的公共健康問題。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin-Ⅰ converting enzyme,ACE)在血壓調(diào)節(jié)過程中起到了重要的作用。近年來,利用酶解食源性蛋白獲取ACE抑制肽已經(jīng)被廣泛報(bào)道。通過多步分離純化是目前發(fā)掘新型ACE抑制肽的常用策略。然而,該方法存在著分離成本高、耗時(shí)費(fèi)力等缺點(diǎn)。隨著越來越多ACE抑制肽的發(fā)現(xiàn),其結(jié)構(gòu)特征與抑制活性間的關(guān)系也逐步被闡明。因此,基于結(jié)構(gòu)信息學(xué)快速篩選ACE抑制肽的策略有助于新型ACE抑制肽的開發(fā)利用。本研究以曲拉酪蛋白作為蛋白源,首先分析了曲拉酪蛋白作為制備生物活性肽的潛能。通過對(duì)曲拉酪蛋白氨基酸種類分析發(fā)現(xiàn),其中疏水性氨基酸、堿性氨基酸和芳香族氨基酸占比分別為41.9%、12.1%和8.4%。該類氨基酸為ACE抑制肽結(jié)構(gòu)中的優(yōu)勢(shì)氨基酸。然后研究分析了曲拉酪蛋白中生物活性肽的分布,發(fā)現(xiàn)其中包含大量ACE抑制肽片段,總ACE抑制肽出現(xiàn)頻次(∑AACE inhibition)為2.1632,表明曲拉酪蛋白是產(chǎn)ACE抑制肽的良好蛋白源。研究繼續(xù)利用模擬酶切分析了單酶(嗜熱菌蛋白酶、堿性蛋白酶、...

【文章頁(yè)數(shù)】：278 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題背景及研究目的和意義
    1.2 高血壓概況
        1.2.1 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶
        1.2.2 ACE介導(dǎo)的血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)
    1.3 ACE催化活性中心構(gòu)效關(guān)系
        1.3.1 ACE催化活性中心
        1.3.2 ACE抑制肽構(gòu)效關(guān)系
    1.4 酶法制備ACE抑制肽研究進(jìn)展
        1.4.1 基于ACE構(gòu)效關(guān)系蛋白酶的選擇
        1.4.2 ACE抑制肽酶法制備研究進(jìn)展
    1.5 基于構(gòu)效關(guān)系A(chǔ)CE抑制肽的篩選
        1.5.1 計(jì)算機(jī)輔助模擬酶切
        1.5.2 定量構(gòu)效關(guān)系模型
        1.5.3 分子對(duì)接技術(shù)
    1.6 ACE抑制肽生物利用度
    1.7 課題來源及主要研究?jī)?nèi)容
第2章 試驗(yàn)材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 主要原料
        2.1.2 主要儀器和設(shè)備
        2.1.3 主要生化試劑
    2.2 曲拉酪蛋白產(chǎn)ACE抑制肽潛能分析
        2.2.1 氨基酸序列檢索
        2.2.2 氨基酸序列比對(duì)
        2.2.3 生物活性肽分布
        2.2.4 模擬酶切分析
        2.2.5 毒性分析
    2.3 水解物ACE抑制活性研究
        2.3.1 曲拉酪蛋白的制備
        2.3.2 蛋白含量的測(cè)定
        2.3.3 多肽含量的測(cè)定
        2.3.4 蛋白酶活力的測(cè)定
        2.3.5 單酶水解曲拉酪蛋白
        2.3.6 雙酶水解曲拉酪蛋白
        2.3.7 水解度的測(cè)定
        2.3.8 Tricine-SDS-PAGE小分子凝膠電泳
        2.3.9 ACE抑制活性測(cè)定
        2.3.10 樣品超濾分級(jí)
        2.3.11 ACE抑制動(dòng)力學(xué)研究
    2.4 構(gòu)效關(guān)系建立
        2.4.1 QSAR模型建立
        2.4.2 多肽指紋圖譜分析
        2.4.3 空間分子對(duì)接
        2.4.4 固相合成
    2.5 降壓及轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制分析
        2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.5.2 細(xì)胞毒性測(cè)定
        2.5.3 NO含量測(cè)定
        2.5.4 eNOS磷酸化分析
        2.5.5 抗胃蛋白酶消化穩(wěn)定性
        2.5.6 Caco-2細(xì)胞單層膜培養(yǎng)
        2.5.7 堿性磷酸酶活性測(cè)定
        2.5.8 ACE抑制肽轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究
        2.5.9 體內(nèi)降壓活性測(cè)定
    2.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
第3章 曲拉酪蛋白產(chǎn)ACE抑制肽潛能研究
    3.1 引言
    3.2 曲拉酪蛋白分析
        3.2.1 曲拉酪蛋白與牛乳酪蛋白同源性分析
        3.2.2 曲拉酪蛋白氨基酸種類分析
        3.2.3 曲拉酪蛋白生物活性肽分布
    3.3 模擬酶切產(chǎn)ACE抑制肽分析
    3.4 復(fù)合酶模擬酶切分析
    3.5 本章小結(jié)
第4章 曲拉酪蛋白水解物ACE抑制活性研究
    4.1 引言
    4.2 蛋白酶酶活力的測(cè)定
    4.3 單酶水解曲拉酪蛋白水解物ACE抑制活性研究
        4.3.1 單酶水解物水解度測(cè)定
        4.3.2 Tricine-SDS-PAGE分析單酶水解物分子量分布
        4.3.3 單酶水解曲拉酪蛋白水解物ACE抑制活性
        4.3.4 不同組分水解物ACE抑制活性
        4.3.5 單酶水解液ACE抑制動(dòng)力學(xué)分析
    4.4 雙酶水解曲拉酪蛋白水解物ACE抑制活性研究
        4.4.1 雙酶水解物水解度測(cè)定
        4.4.2 Tricine-SDS-PAGE分析雙酶水解物分子量分布
        4.4.3 雙酶水解曲拉酪蛋白水解物的ACE抑制活性
        4.4.4 雙酶水解液ACE抑制動(dòng)力學(xué)分析
    4.5 本章小結(jié)
第5章 基于構(gòu)效關(guān)系篩選水解物中降壓肽研究
    5.1 引言
    5.2 定量構(gòu)效關(guān)系模型建立
    5.3 水解物多肽指紋圖譜鑒定
    5.4 QSAR模型篩選ACE抑制活肽
        5.4.1 QSAR模型篩選單酶水解物中ACE抑制肽
        5.4.2 QSAR模型篩選雙酶水解物中ACE抑制肽
    5.5 空間分子對(duì)接研究
        5.5.1 單酶水解物中潛在ACE抑制肽空間分子對(duì)接
        5.5.2 雙酶水解物中潛在ACE抑制肽空間分子對(duì)接
    5.6 ACE抑制肽活性驗(yàn)證
    5.7 ACE抑制肽動(dòng)力學(xué)分析
    5.8 本章小結(jié)
第6章 多肽KYIPIQ轉(zhuǎn)運(yùn)途徑及降壓作用研究
    6.1 引言
    6.2 多肽KYIPIQ對(duì) HUVECs細(xì)胞毒性的測(cè)定
    6.3 多肽KYIPIQ對(duì) HUVECs產(chǎn)胞內(nèi)外NO的影響
    6.4 多肽KYIPIQ對(duì) HUVECs的 e NOS磷酸化作用
    6.5 多肽KYIPIQ抗胃蛋白酶穩(wěn)定性
    6.6 多肽吸收機(jī)制分析
        6.6.1 Caco-2細(xì)胞單層膜完整性分析
        6.6.2 多肽KYIPIQ對(duì) Caco-2 細(xì)胞毒性的測(cè)定
        6.6.3 多肽KYIPIQ抗 Caco-2 細(xì)胞分泌酶穩(wěn)定性研究
        6.6.4 多肽KYIPIQ跨 Caco-2 細(xì)胞單層膜的運(yùn)輸
        6.6.5 多肽KYIPIQ跨 Caco-2 細(xì)胞單層膜機(jī)制研究
    6.7 多肽KYIPIQ在 SHRs體內(nèi)的降壓效果
    6.8 本章小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
展望
參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
附錄三
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其它成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3755451