粗壯脈紋孢菌具有高產(chǎn)纖維素酶和較強(qiáng)的生產(chǎn)類胡蘿卜素的能力,目前對(duì)其所產(chǎn)纖維素酶和類胡蘿卜素已有相應(yīng)研究,而對(duì)其所產(chǎn)蛋白酶卻鮮有研究。本論文以粗壯脈紋孢菌為出發(fā)菌株,將其接種在豆渣上進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵,對(duì)其產(chǎn)蛋白酶和生產(chǎn)可溶性蛋白質(zhì)的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化,對(duì)所產(chǎn)蛋白酶進(jìn)行了分離純化和鑒定,并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了探討,最后將菌株用于固態(tài)發(fā)酵菜籽粕,探討改善其營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的方法。主要研究結(jié)果如下:1、確定豆渣作為固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的原料,采用單因素法和響應(yīng)面Box-Behnken組合設(shè)計(jì)法優(yōu)化了菌株產(chǎn)蛋白酶和可溶性蛋白質(zhì)的發(fā)酵條件。為方便實(shí)驗(yàn)確定最佳產(chǎn)酶和生產(chǎn)可溶性蛋白質(zhì)的發(fā)酵條件如下:豆渣10 g,加水量21 mL,接種量2 mL,培養(yǎng)溫度30℃,培養(yǎng)基初始pH 5.0,發(fā)酵時(shí)間72 h。最終蛋白酶酶活力為1959.82±9.54 U/g,可溶性蛋白質(zhì)含量達(dá)到9.99±0.04mg/g,發(fā)現(xiàn)得到的蛋白酶活力和可溶性蛋白質(zhì)含量與預(yù)測(cè)值相近,說(shuō)明模型的擬合程度較好。2、采用硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換層析和Sephadex G-75對(duì)粗壯脈紋孢菌蛋白酶進(jìn)行分離純化,... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

13圖 2.2 蛋白酶活力的測(cè)定Fig 2.2 The determination of protease activity（3）蛋白酶活力計(jì)計(jì)算在 40℃每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生 1μg 酪氨酸，為 1 個(gè)蛋白酶活力單位。

圖 2.3 蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 2.3 The standard curve of protein（4）樣品測(cè)定同（3），將標(biāo)準(zhǔn)溶液換成樣品，通過(guò)樣品吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品質(zhì)含量，每個(gè)樣品重復(fù)三次。（5）計(jì)算式中：C―查的標(biāo)準(zhǔn)曲線值（μg）N―稀釋倍數(shù)W―樣品重量（g）.2.4 酶的比活力酶的比活力不僅能衡量酶的純度，而且也表示單位質(zhì)量的蛋白質(zhì)的催。酶的比活力與蛋白酶的純度呈正相關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]粗壯脈紋孢菌孢子中β-胡蘿卜素的提取優(yōu)化[J]. 杜佳,胡盛本,余誠(chéng)瑋,梁莎,鄧澤元,李靜.  食品工業(yè). 2017(11)
[2]一種高效表達(dá)堿性蛋白酶的新型啟動(dòng)子的篩選及研究[J]. 陳坤,袁飛燕,柴昊男,劉煥,王興吉,張會(huì)圖,路福平.  生物技術(shù)通報(bào). 2018(01)
[3]蠟樣芽胞桿菌YSQ08堿性蛋白酶aprA基因在畢赤酵母中的表達(dá)[J]. 黃東彥,Shanti Mazu,朱輝,朱劍鋒,胡文鋒.  現(xiàn)代食品科技. 2016(12)
[4]菜籽粕發(fā)酵脫毒效果模糊評(píng)判[J]. 方潔,徐浩,魏芬,李菁楠,丁承超,劉武康,丁之恩.  中國(guó)糧油學(xué)報(bào). 2016(03)
[5]通過(guò)粗壯脈紋孢菌發(fā)酵改善豆粕營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)的研究[J]. 任志青,鄧澤元,宋瀝文,楊建遠(yuǎn),劉蓉,范亞葦.  食品工業(yè)科技. 2016(12)
[6]蠟狀芽孢桿菌產(chǎn)中性蛋白酶發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 解萬(wàn)翠,楊亞?wèn)|,楊錫洪,吳帥,吉宏武.  食品與機(jī)械. 2016(01)
[7]米曲霉蛋白酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 馬俊陽(yáng),諸葛斌,方慧英,宗紅,孫進(jìn),龔星慧,諸葛健,樓笑笑,馮倩.  微生物學(xué)通報(bào). 2014(01)
[8]粗壯脈紋孢菌發(fā)酵豆渣過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)成分的變化研究[J]. 葉俊,李靜,范亞葦,楊風(fēng)玲,鄧澤元.  中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2013(12)
[9]混菌固態(tài)發(fā)酵山藥皮產(chǎn)類胡蘿卜素的工藝研究[J]. 楊婷婷,蔣海偉,賀玉珊,鄧澤元,劉蓉,李靜.  食品工業(yè)科技. 2014(07)
[10]脈胞菌lca-1基因調(diào)控?zé)o性產(chǎn)孢及類胡蘿卜素的合成（英文）[J]. 何純,孫憲昀,段碧華.  Agricultural Science & Technology. 2013(01)

博士論文
[1]南極嗜冷菌Colwellia sp.NJ341產(chǎn)適冷蛋白酶及低溫適應(yīng)性的研究[D]. 王全富.中國(guó)海洋大學(xué) 2006

碩士論文
[1]豬小腸上皮細(xì)胞大豆凝集素特異性結(jié)合蛋白的分離和鑒定[D]. 沙爽.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]堿性蛋白酶的分離純化及其酶學(xué)特性的研究[D]. 楊麗媛.東北師范大學(xué) 2015
[3]米曲霉蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)及其應(yīng)用研究[D]. 馮穎杰.江南大學(xué) 2015
[4]粗糙脈孢菌ncw1基因功能研究[D]. 陳永.天津科技大學(xué) 2015
[5]不同碳源誘導(dǎo)粗壯脈紋胞菌CGMCC3088產(chǎn)纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)的研究[D]. 劉沛毅.南昌大學(xué) 2014
[6]粗壯脈紋孢菌發(fā)酵農(nóng)副產(chǎn)品生產(chǎn)類胡蘿卜素的研究[D]. 楊風(fēng)玲.南昌大學(xué) 2014
[7]產(chǎn)蛋白酶海洋菌株的選育及發(fā)酵豆粕的研究[D]. 鐘泓波.華南理工大學(xué) 2014
[8]益生菌混合發(fā)酵菜籽粕及其營(yíng)養(yǎng)特性的研究[D]. 肖萌.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[9]粗糙脈胞菌中兩個(gè)纖維二糖脫氫酶基因的同源表達(dá)、蛋白純化及作用機(jī)制研究[D]. 徐晨偉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[10]深海菌株Exiguobacterium sp.SWJS2發(fā)酵產(chǎn)蛋白酶、酶學(xué)性質(zhì)及酶解特異性研究[D]. 雷芬芬.華南理工大學(xué) 2014



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