腫瘤是引起人類死亡率持續(xù)攀升的元兇之一,腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移主要憑借腫瘤血管來供應(yīng)必要的氧氣與營養(yǎng),血管缺乏的腫瘤具有自限性生長的特點(diǎn)。如今,眾多的抗血管藥物已被開發(fā)出來用于阻斷外界營養(yǎng)供給實現(xiàn)腫瘤饑餓治療,但此藥物發(fā)揮效用后,腫瘤細(xì)胞會通過自噬增強(qiáng)效應(yīng)為自身增殖提供內(nèi)源性營養(yǎng)物質(zhì),從而進(jìn)行自我保護(hù)導(dǎo)致抗腫瘤效果嚴(yán)重下降。破壞腫瘤血管系統(tǒng)的同時抑制增強(qiáng)的自噬,對腫瘤的外源性與內(nèi)源性營養(yǎng)來源進(jìn)行雙重阻斷,將會是一種有前途的抗腫瘤方法。因此,本課題以海藻酸鈉（Sodium alginate,Alg）為基質(zhì)材料,Fe3+為交聯(lián)劑與門控開關(guān),康普瑞�。–ombretastatin A4,CA4）及硫酸羥基氯喹（Hydroxychloroquine,HCQ）為治療藥物,構(gòu)建了一種具有定位重塑功能的智能納米凝膠CA4-FeAlg/HCQ,用于共遞送血管阻斷劑CA4與自噬抑制劑HCQ,實現(xiàn)CA4在腫瘤血管和HCQ在腫瘤細(xì)胞中的貫序釋放,以及對A549非小細(xì)胞肺癌的協(xié)同治療。本課題首先將血管阻斷劑CA4接枝到Alg上,合成接枝率為14%的Alg-CA4偶聯(lián)物,提高CA4的生物利用度與穩(wěn)定性。然后與Fe3+... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省211工程院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞
第一章 前言
第二章 CA4-FeAlg/HCQ納米凝膠的合成及表征
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
    2 實驗內(nèi)容
        2.1 Alg-CA4偶聯(lián)物的合成
        2.2 Alg-CA4偶聯(lián)物的表征
            2.2.1 紫外-可見光(UV-Vis )全波長掃描
            2.2.2 傅立葉變換紅外光譜(FT IR)表征
            2.2.3 核磁共振氫譜(~1H NMR)檢測
            2.2.4 Zeta電位的考察
        2.3 Alg-CA4接枝率的考察
            2.3.1 CA4標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.3.2 接枝率的測定
        2.4 CA4-FeAlg的制備與表征
            2.4.1 CA4-FeAlg的制備
            2.4.2 透射電鏡(TEM)表征
            2.4.3 CA4-FeAlg在模擬TME下的粒徑轉(zhuǎn)化研究
        2.5 HCQ含量測定方法的建立
            2.5.1 HCQ的紫外-可見光(UV-Vis)全波長掃描
            2.5.2 HCQ標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.6 CA4-FeAlg/HCQ的制備與表征
            2.6.1 CA4-FeAlg載藥能力的考察
            2.6.2 CA4-FeAlg/HCQ的制備
            2.6.3 粒徑分布及電位的考察
            2.6.4 分散性考察
        2.7 CA4-FeAlg/HCQ的體外釋藥實驗
    3 結(jié)果與討論
        3.1 Alg-CA4偶聯(lián)物的表征
            3.1.1 UV-Vis全波長掃描分析
            3.1.2 FT-IR表征結(jié)果
            3.1.3 ~1H NMR檢測
            3.1.4 Zeta電位的考察
        3.2 Alg-CA4接枝率的確定
        3.3 CA4-FeAlg的制備與表征
            3.3.1 TEM表征
            3.3.2 CA4-FeAlg在模擬TME下的粒徑轉(zhuǎn)化研究
        3.4 HCQ含量測定方法的建立
            3.4.1 HCQ的紫外-可見光全波長掃描
            3.4.2 HCQ標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.5 CA4-FeAlg/HCQ的制備與表征
            3.5.1 CA4-FeAlg載藥能力的考察
            3.5.2 粒徑分布及電位的考察
            3.5.3 分散性考察
        3.6 體外釋藥實驗
    4 本章小結(jié)
第三章 CA4-FeAlg/HCQ納米凝膠的體外抗腫瘤活性評價
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器與設(shè)備
        1.2 試劑
        1.3 主要試劑的配制
    2 實驗方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.1 細(xì)胞的復(fù)蘇
            2.1.2 細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.1.3 細(xì)胞的凍存
        2.2 A549細(xì)胞對納米凝膠的攝取行為考察
        2.3 溶酶體共定位的研究
        2.4 體外·OH的測定
        2.5 A549細(xì)胞內(nèi)H_2O_2水平的檢測
        2.6 A549細(xì)胞內(nèi)pH值的檢測
        2.7 溶酶體的損傷研究
        2.8 CA4-FeAlg/HCQ的自噬抑制考察
            2.8.1 免疫組化方法
            2.8.2 ELISA試劑盒考察自噬水平變化
        2.9 體外三維多細(xì)胞球檢測腫瘤深部滲透
            2.9.1 體外三維多細(xì)胞球模型的建立
            2.9.2 腫瘤深部滲透實驗
        2.10 SRB法測定CA4-FeAlg/HCQ對A549細(xì)胞的毒性行為
            2.10.1 SRB法
            2.10.2 A549細(xì)胞的抑制率實驗
        2.11 Calcein-AM/PI雙染色法檢測細(xì)胞活性
    3 結(jié)果與討論
        3.1 A549細(xì)胞對納米凝膠的攝取行為考察
        3.2 溶酶體共定位的研究
        3.3 體外·OH的測定
        3.4 A549細(xì)胞內(nèi)H_2O_2水平的檢測
        3.5 A549細(xì)胞內(nèi)pH值的檢測
        3.6 溶酶體的損傷研究
        3.7 CA4-FeAlg/HCQ的自噬抑制考察
            3.7.1 免疫組化方法
            3.7.2 ELISA試劑盒考察自噬水平變化
        3.8 體外三維多細(xì)胞球檢測腫瘤深部滲透
        3.9 SRB法測定CA4-FeAlg/HCQ對A549細(xì)胞的毒性行為
        3.10 Calcein-AM/PI雙染色法檢測細(xì)胞活性
    4 本章小結(jié)
第四章 CA4-FeAlg/HCQ納米凝膠的體內(nèi)活性研究
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
    2 實驗方法
        2.1 動物模型
            2.1.1 實驗動物
            2.1.2 A549荷瘤裸鼠模型的建立
        2.2 體內(nèi)分布實驗
        2.3 免疫熒光染色觀察體內(nèi)腫瘤深部滲透性能
        2.4 CA4-FeAlg/HCQ在A549荷瘤裸鼠體內(nèi)的藥效學(xué)評價
            2.4.1 實驗分組與操作步驟
            2.4.2 H&E染色法檢測組織病理變化
        2.5 腫瘤血管密度的考察
        2.6 冰凍切片檢測腫瘤部位的ROS水平
        2.7 腫瘤部位的自噬水平研究
    3 結(jié)果與討論
        3.1 體內(nèi)分布結(jié)果
        3.2 體內(nèi)腫瘤深部滲透性能的分析
        3.3 CA4-FeAlg/HCQ在A549荷瘤裸鼠體內(nèi)的藥效學(xué)評價
            3.3.1 治療期間裸鼠腫瘤體積與體重的變化
            3.3.2 H&E染色法檢測組織病理變化
        3.4 腫瘤血管密度的考察
        3.5 腫瘤部位的ROS水平
        3.6 腫瘤部位的自噬水平研究
    4 本章小結(jié)
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
個人簡介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)及腫瘤微環(huán)境響應(yīng)新型靶向遞藥系統(tǒng)的研究[D]. 馬鵬凱.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[2]狗棗獼猴桃多酚的抗氧化與抗腫瘤效應(yīng)研究[D]. 左麗麗.哈爾濱工業(yè)大學(xué) 2013
[3]小分子藥物與牛血清白蛋白相互作用研究[D]. 徐洪亮.吉林大學(xué) 2013
[4]聚磷酸酯納米凝膠作為抗癌藥物輸送載體的研究[D]. 吳卷.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2010

碩士論文
[1]共附生微生物抗腫瘤活性菌的篩選、鑒定及活性產(chǎn)物的研究[D]. 馬君千.揚(yáng)州大學(xué) 2012
[2]抑制自噬與抗血管聯(lián)合治療肝癌的實驗研究[D]. 李丁.第二軍醫(yī)大學(xué) 2011



本文編號：3636921