溶藻菌主要是指通過直接或間接作用方式抑制富營養(yǎng)化水體中的微藻的生長并進一步溶解藻細胞的一類水環(huán)境微生物。絕大部分溶藻菌可以利用水體中的微藻類為碳源,氮源等無機能源進行生長,并且參與其代謝和降解過程。大量研究表明,選用微生物方法除藻具有高效、節(jié)約資金、二次污染風險低等優(yōu)勢,已成為目前國內外作為治理淡水湖泊水體富營養(yǎng)化的首選方法,所以進一步深入探究溶藻菌特性和抑藻活性物質,以及溶藻過程中的機理具有深遠的現(xiàn)實意義。本實驗選用在淡水資源中分布廣泛、造成危害最大的水華藍藻代表——銅綠微囊藻（Microcystis aeruginosa）為控藻對象,從富營養(yǎng)化的水體中通過液體侵染法篩選出1株具有高效溶藻效果的溶藻菌EHB01。利用16S rRNA基因序列分析法,結合微生物形態(tài)學特征和溶藻菌生理生化等試驗特征,對菌株EHB01進行鑒定。利用有機溶劑相似相溶的原理,通過有機溶劑對菌株EHB01的發(fā)酵粗提液進行萃取,并通過氣相-質譜聯(lián)用儀對萃取的物質進行了GC-MS分析。采用單因素試驗和響應面設計方法,進行菌株EHB01溶藻條件的優(yōu)化。主要得到以下結果:1.在富營養(yǎng)化水樣中篩出一株具有高效溶藻效果的細菌... 

【文章來源】：西北師范大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

溶藻菌CFC

第2章溶藻細菌的篩選與鑒定19共培養(yǎng)數(shù)小時進行溶藻效果觀察和測定，其中菌株A，B對銅綠微囊藻細胞葉綠素影響最不明顯，菌株C和D共培養(yǎng)下的藻細胞發(fā)生黃化現(xiàn)象，部分藻細胞裂解死亡，對藻細胞生長具有一定的抑制作用。菌株E和F則對藻細胞生長產生了明顯的抑制作用，藻細胞葉綠素含量分別下降了2.08±0.26mg/L，2.2±0.13mg/L，其中菌株F抑藻作用最為明顯。Zhang等在研究一株鏈霉菌StreptomyceseurocidicusJXJ-0089對藻細胞的作用時，主要通過中斷電子在藻類光合系統(tǒng)中的運輸來抑制藻細胞的光合作用和抑制藻細胞的抗氧化酶活性，破壞細胞內活性氧的動態(tài)平衡[81]。銅綠微囊藻的抗氧化酶活性和光合作用被明顯抑制，由藻細胞內ROS水平持續(xù)增加所誘導的氧化損傷起到了關鍵作用[82]。2.3.2EHB01溶藻細菌的鑒定2.3.2.1菌株的形態(tài)特征圖2-2細菌EHB01的顯微形態(tài)Fig2-2MicromorphologyofbacteriaEHB01分離篩選的EHB01，在固體培養(yǎng)基上，菌落表面光滑，而且較濕潤，用結晶紫（圖2-2A）染色和掃描電子顯微鏡（圖2-2B）染色顯示EHB01的細胞厚且呈棒狀，帶有末端孢子，長約2.22.5μm，寬約0.650.75μm。革蘭氏染色為陰性。2.3.2.2EHB01的系統(tǒng)發(fā)育分析對菌株EHB01的16SrRNA基因序列進行PCR擴增，獲得1329bp左右個基因片段。通過使用MEGA7.0軟件構建系統(tǒng)進化樹，如圖2-3所示，EHB01與RalstoniapickettiiCP12（KF378754.1）之間的序列相似性高達98.33％。結合形態(tài)特征和分子生物學鑒定該菌株隸屬于羅爾斯頓菌屬（Ralstonia）。ABb

第3章溶藻細菌的EHB01的溶藻特性研究23菌上清液按5%接種于銅綠微囊藻中，設置條件同第二章2.2.3。培養(yǎng)48h后測定其溶藻效率，判斷其溶藻作用方式。3.2.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析實驗數(shù)據(jù)處理選用SPSS17.0，圖表制作選用Origin7.5。3.3結果與分析3.3.1EHB01菌株的生長曲線菌株EHB01在0-7h時處于停滯期，此后從8-23h，細菌個數(shù)增多，進入了EHB01生長的對數(shù)時期，細菌密度變大，菌株新陳代謝加強，生物量呈指數(shù)增長。從24-31h進入穩(wěn)定期，細菌密度基本保持不變。在培養(yǎng)31h之后由于培養(yǎng)基營養(yǎng)物質匱乏，大部分菌株生長處于緩慢階段，處于凋亡期的菌株出現(xiàn)死亡。圖3-1細菌EHB01的生長曲線Fig3-1GrothcurveofstrainEHB013.3.2EHB01溶藻細菌的溶藻過程在菌藻共培養(yǎng)初始階段時，銅綠微囊藻的藻細胞生長良好，個體數(shù)目多（圖3-2a）。當共培養(yǎng)24h后，視野中的大量藻類細胞出現(xiàn)萎縮，其體積顯著減少（圖3-2b）。當細胞處理48h后，它們被大量細菌包圍，藻類細胞大量死亡并產生黃化現(xiàn)象（圖3-2c）。根據(jù)暴露的藻類細胞的形態(tài)，該菌株表現(xiàn)出明顯的抑藻作用。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]銅綠微囊藻的胞外有機物對不同混凝劑除藻效果的影響[J]. 吳昊瀾,劉菲,徐慧,焦茹媛,王東升,楊曉芳.  環(huán)境工程學報. 2020(05)
[2]低平均光強下波動光對銅綠微囊藻生長的影響[J]. 孫昕,湯加剛,李鵬飛,孫杰,何飛飛,由黎,賀健程.  水生生物學報. 2020(02)
[3]深海貝萊斯芽孢桿菌DH82的抑菌活性物質初步分離純化及其抑菌譜檢測[J]. 王青華,唐旭,孫曉暉,萬婧倞,黃仕新,徐長安.  應用海洋學學報. 2020(01)
[4]1株太湖流域土著溶藻菌的溶藻特性研究[J]. 張冬慧,楊蘇文,趙宗升,金位棟,閆玉紅.  環(huán)境科學與技術. 2019(09)
[5]利用微生物控制藍藻研究進展[J]. 陳莉婷,左俊,陶思依,戴國飛,宋立榮,甘南琴.  武漢大學學報(理學版). 2019(04)
[6]氮磷形態(tài)與濃度對銅綠微囊藻和斜生柵藻生長的影響[J]. 許海,陳丹,陳潔,朱廣偉,秦伯強,朱夢圓,張運林.  中國環(huán)境科學. 2019(06)
[7]富營養(yǎng)化藍藻水華發(fā)生的主要成因與機制研究綜述[J]. 張?zhí)m婷.  水利發(fā)展研究. 2019(05)
[8]太湖2007-2016十年水環(huán)境演變及“以漁改水”策略探討[J]. 谷孝鴻,曾慶飛,毛志剛,陳輝輝,李紅敏.  湖泊科學. 2019(02)
[9]海河流域溶藻菌Q1的溶藻效果分析及鑒定[J]. 喬鏡澄,張成林,馬躍超.  揚州大學學報(農業(yè)與生命科學版). 2019(01)
[10]高效銅綠微囊藻溶藻菌WJ6的分離鑒定及溶藻特性[J]. 洪桂云,馬少雄,王佳,張瑾.  中國環(huán)境科學. 2018(11)

碩士論文
[1]溶藻細菌的分離鑒定及其胞外活性物質對球形棕囊藻的溶藻特性研究[D]. 李薔.暨南大學 2012
[2]三種喹諾酮類抗生素對斜生柵藻的毒性效應[D]. 陳柳芳.東北師范大學 2010



本文編號：3593042