單葡萄糖醛酸甘草次酸（GAMG）作為甘草酸（glycyrrhizin,GL）的衍生物,其生物利用度和生理活性均強(qiáng)于GL,且甜度是GL的5倍,具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)室前期篩選到一株能夠產(chǎn)β-D葡萄糖醛酸苷酶（β-D-Glucuronidase,GUS）的東鄉(xiāng)野生稻內(nèi)生真菌菌株Chaetomium globosum S108,其產(chǎn)生的GUS能夠高效定向催化GL生成單葡萄糖醛酸甘草次酸（Glycyrrhetinic acid monoglucuronide,GAMG）。但是由于GUS酶的產(chǎn)量低,限制了其工業(yè)化應(yīng)用。因此,為了提高C.globosum S108產(chǎn)GUS的活力,降低GAMG催化生產(chǎn)的成本,本論文以C.globosum S108為研究對象,以β-D葡萄糖醛酸苷酶活力為主要指標(biāo)初步開展了C.globosum S108產(chǎn)GUS的250 m L搖瓶和5 L發(fā)酵罐的發(fā)酵條件優(yōu)化。此外,還對該GUS基因進(jìn)行了克隆及表達(dá),研究結(jié)果如下:1.開展了C.globosum S108搖瓶培養(yǎng)產(chǎn)GUS的碳源優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)蔗糖為C.globosum S108產(chǎn)GUS的最適碳源,在5 g/L蔗糖濃度條件,酶... 

【文章來源】：江西科技師范大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 球毛殼菌簡介
    1.2 甘草簡介
        1.2.1 甘草的概述及藥用價(jià)值
        1.2.2 甘草的主要活性成分
        1.2.3 微生物轉(zhuǎn)化甘草酸的研究進(jìn)展
    1.3 單葡萄糖醛酸甘草次酸的概述
        1.3.1 GAMG的結(jié)構(gòu)、活性及應(yīng)用
        1.3.2 GAMG生物轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展
    1.4 β-D葡萄糖醛酸苷酶概述
    1.5 β-D葡萄糖醛酸苷酶的產(chǎn)酶條件研究
    1.6 β-D葡萄糖醛酸苷酶的發(fā)酵罐生產(chǎn)
    1.7 β-D葡萄糖醛酸苷酶基因克隆的研究現(xiàn)狀
    1.8 本課題的研究意義、內(nèi)容與技術(shù)路線
        1.8.1 研究意義
        1.8.2 研究內(nèi)容
        1.8.3 技術(shù)路線
第2章 生產(chǎn)培養(yǎng)基的成分優(yōu)化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 供試菌株
        2.1.2 材料與試劑
        2.1.3 儀器與設(shè)備
        2.1.4 培養(yǎng)基
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 GAMG的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
        2.2.2 搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)
        2.2.3 菌體干重測定
        2.2.4 GUS的提取及酶活測定
        2.2.5 總糖的測定方法
        2.2.6 Chaetomium globosum S108 的宏觀形態(tài)觀察
        2.2.7 總氮的測定方法
        2.2.8 碳、氮源的優(yōu)化
        2.2.9 5L發(fā)酵罐放大試驗(yàn)
    2.3 研究結(jié)果
        2.3.1 GAMG的測定方法建立
        2.3.2 UPLC檢測方法驗(yàn)證
        2.3.3 不同碳源對C.globosum S108 發(fā)酵產(chǎn)酶的影響
        2.3.4 蔗糖濃度對C.globosum S108 發(fā)酵產(chǎn)酶的影響
        2.3.5 不同氮源對C.globosum S108 發(fā)酵產(chǎn)酶的影響
        2.3.6 蛋白胨濃度對C.globosum S108 發(fā)酵產(chǎn)酶的影響
        2.3.7 不同氮源下C.globosum S108 的宏觀形態(tài)
    2.4 本章小結(jié)
第3章 GUS的發(fā)酵罐發(fā)酵優(yōu)化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 材料與試劑
        3.1.2 儀器與設(shè)備
        3.1.3 培養(yǎng)基
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 種子制備
        3.2.2 5L發(fā)酵罐培養(yǎng)
        3.2.3 發(fā)酵液成分檢測
        3.2.4 5L發(fā)酵罐攪拌控制相關(guān)實(shí)驗(yàn)
    3.3 研究結(jié)果
        3.3.1 不同類型攪拌器對C.globosum S108 發(fā)酵產(chǎn)酶的影響
        3.3.2 不同類型攪拌器對C.globosum S108 菌體形態(tài)的影響
        3.3.3 不同類型攪拌器對C.globosum S108 菌體生長的影響
        3.3.4 不同類型攪拌器對C.globosum S108 菌體糖、氮代謝的影響
        3.3.5 不同類型攪拌器對發(fā)酵體系pH的影響
        3.3.6 不同攪拌速率對C.globosum S108 發(fā)酵產(chǎn)酶的影響
    3.4 本章小結(jié)
第4章 β-D-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆與表達(dá)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 菌株和質(zhì)粒
        4.1.2 β-D-葡萄糖醛酸苷酶克隆引物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 培養(yǎng)基
        4.1.5 常用溶液
        4.1.6 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 大腸桿菌原核表達(dá)cg-Gus
    4.3 研究結(jié)果
        4.3.1 β-D葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆表達(dá)
        4.3.2 β-D葡萄糖醛酸苷酶原核表達(dá)體系的構(gòu)建
    4.4 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3591717