隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,越來(lái)越多的科研工作者致力于開(kāi)發(fā)及利用極端微生物資源,許多極端環(huán)境中的微生物及其產(chǎn)生的酶,在工業(yè)生產(chǎn)上具有重大的應(yīng)用價(jià)值和研究意義。海棲熱袍菌（Thermotoga maritima）屬于極端嗜熱微生物,來(lái)源于深�；鹕�,因其生長(zhǎng)環(huán)境十分特殊,所以很難直接用于工業(yè)化大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)。目前的主流方法是:利用基因工程手段克隆嗜熱酶基因并轉(zhuǎn)入合適的表達(dá)系統(tǒng)中使其高效表達(dá),獲得工業(yè)上所需的嗜熱酶。本課題實(shí)驗(yàn)對(duì)象為從海棲熱袍菌中提取出的內(nèi)切-β-1,4-葡聚糖酶（TM1525）和阿拉伯內(nèi)切-β-1,4-半乳聚糖酶（TM1201）。研究?jī)煞N蛋白酶的高效表達(dá)條件、檢測(cè)兩種酶的酶活性質(zhì)以及利用正交實(shí)驗(yàn)法和響應(yīng)面法對(duì)兩種酶的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。本文主要研究的內(nèi)容及結(jié)果如下:1、分別利用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的兩種酶重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Ecoli.BL21,獲得兩種工程菌,命名為T(mén)M1525工程菌和TM1201工程菌。2、利用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、SDS-PAGE電泳分析、Western blot等方法分析表達(dá)情況,并優(yōu)化了工程菌表達(dá)條件。3、利用生物信息學(xué)軟件分析兩種酶的理化性質(zhì),采用Ni-NTA... 

【文章來(lái)源】：東華大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

纖維素的分子結(jié)構(gòu)

活= (E(OD)×1000000)/(0.777×10×10)收值;系數(shù);L 鄰硝基酚的吸收值;min)(g)純化與酶活性質(zhì)分析表達(dá)情況凝膠電泳檢測(cè)誘導(dǎo)前后的菌液制樣并采用 12%的 SDS-PA

圖 3-2 TM1525 蛋白免疫印跡檢測(cè)M：marker 1:誘導(dǎo)后樣品道1與Marker對(duì)比可知,在32kDa處有顯著清成功表達(dá)。菌的誘導(dǎo)條件優(yōu)化形式分析種環(huán)境中的 TM1525 工程菌,取各自破碎后上 檢測(cè)表達(dá)形式。結(jié)果如下圖 3-3 與 3-4 所示

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]極端嗜熱微生物及其高溫適應(yīng)機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 曾靜,郭建軍,邱小忠,王賢卓,袁林.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(09)
[2]嗜冷酶的特性及其在食品工業(yè)上的應(yīng)用[J]. 王繼蓮,魏云林,李明源.  食品工業(yè)科技. 2014(09)
[3]響應(yīng)面法優(yōu)化芽孢桿菌25-2產(chǎn)纖維素酶發(fā)酵條件[J]. 胡麗娟,薛高尚,盧向陽(yáng),田云.  釀酒科技. 2012(04)
[4]極端環(huán)境下的微生物[J]. 金黎明.  生物學(xué)教學(xué). 2010(04)
[5]植物內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶基因研究進(jìn)展[J]. 柴國(guó)華,付先虎,白澤濤,黃軍艷,劉勝毅.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2009(05)
[6]β-半乳糖苷酶研究進(jìn)展[J]. 張莉,李慶章,田雷.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(07)
[7]耐熱β-半乳糖苷酶基因在大腸桿菌中的表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 龔月生,劉錦妮,王晶,楊明明,袁新宇.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2008(10)
[8]纖維素酶的研究進(jìn)展與發(fā)展趨勢(shì)[J]. 顧方媛,陳朝銀,石家驥,錢(qián)世鈞.  微生物學(xué)雜志. 2008(01)
[9]纖維素化學(xué)研究進(jìn)展[J]. 葉代勇,黃洪,傅和青,陳煥欽.  化工學(xué)報(bào). 2006(08)
[10]嗜熱菌XZ2K2葡聚糖蔗糖酶基因的克隆與表達(dá)[J]. 蘇龍,韋宇拓,黃日波.  化學(xué)與生物工程. 2006(07)

碩士論文
[1]海棲熱袍菌中嗜熱酶基因的克隆及發(fā)酵條件優(yōu)化[D]. 梅旭旭.東華大學(xué) 2017
[2]海棲熱袍菌葡聚糖內(nèi)切酶的克隆表達(dá)及酶學(xué)活性研究[D]. 左萬(wàn)兵.江蘇大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3544843