隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,越來越多的科研工作者致力于開發(fā)及利用極端微生物資源,許多極端環(huán)境中的微生物及其產(chǎn)生的酶,在工業(yè)生產(chǎn)上具有重大的應用價值和研究意義。海棲熱袍菌（Thermotoga maritima）屬于極端嗜熱微生物,來源于深�；鹕�,因其生長環(huán)境十分特殊,所以很難直接用于工業(yè)化大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)。目前的主流方法是:利用基因工程手段克隆嗜熱酶基因并轉(zhuǎn)入合適的表達系統(tǒng)中使其高效表達,獲得工業(yè)上所需的嗜熱酶。本課題實驗對象為從海棲熱袍菌中提取出的內(nèi)切-β-1,4-葡聚糖酶（TM1525）和阿拉伯內(nèi)切-β-1,4-半乳聚糖酶（TM1201）。研究兩種蛋白酶的高效表達條件、檢測兩種酶的酶活性質(zhì)以及利用正交實驗法和響應面法對兩種酶的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。本文主要研究的內(nèi)容及結(jié)果如下:1、分別利用本實驗室構(gòu)建的兩種酶重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Ecoli.BL21,獲得兩種工程菌,命名為TM1525工程菌和TM1201工程菌。2、利用IPTG誘導表達、SDS-PAGE電泳分析、Western blot等方法分析表達情況,并優(yōu)化了工程菌表達條件。3、利用生物信息學軟件分析兩種酶的理化性質(zhì),采用Ni-NTA... 

【文章來源】：東華大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

纖維素的分子結(jié)構(gòu)

活= (E(OD)×1000000)/(0.777×10×10)收值;系數(shù);L 鄰硝基酚的吸收值;min)(g)純化與酶活性質(zhì)分析表達情況凝膠電泳檢測誘導前后的菌液制樣并采用 12%的 SDS-PA

圖 3-2 TM1525 蛋白免疫印跡檢測M：marker 1:誘導后樣品道1與Marker對比可知,在32kDa處有顯著清成功表達。菌的誘導條件優(yōu)化形式分析種環(huán)境中的 TM1525 工程菌,取各自破碎后上 檢測表達形式。結(jié)果如下圖 3-3 與 3-4 所示

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]海棲熱袍菌中嗜熱酶基因的克隆及發(fā)酵條件優(yōu)化[D]. 梅旭旭.東華大學 2017
[2]海棲熱袍菌葡聚糖內(nèi)切酶的克隆表達及酶學活性研究[D]. 左萬兵.江蘇大學 2016



本文編號：3544843