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海棲熱袍菌兩種嗜熱酶基因工程菌發(fā)酵條件優(yōu)化

發(fā)布時間:2021-12-19 18:20
  隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,越來越多的科研工作者致力于開發(fā)及利用極端微生物資源,許多極端環(huán)境中的微生物及其產(chǎn)生的酶,在工業(yè)生產(chǎn)上具有重大的應用價值和研究意義。海棲熱袍菌(Thermotoga maritima)屬于極端嗜熱微生物,來源于深;鹕,因其生長環(huán)境十分特殊,所以很難直接用于工業(yè)化大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)。目前的主流方法是:利用基因工程手段克隆嗜熱酶基因并轉(zhuǎn)入合適的表達系統(tǒng)中使其高效表達,獲得工業(yè)上所需的嗜熱酶。本課題實驗對象為從海棲熱袍菌中提取出的內(nèi)切-β-1,4-葡聚糖酶(TM1525)和阿拉伯內(nèi)切-β-1,4-半乳聚糖酶(TM1201)。研究兩種蛋白酶的高效表達條件、檢測兩種酶的酶活性質(zhì)以及利用正交實驗法和響應面法對兩種酶的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。本文主要研究的內(nèi)容及結(jié)果如下:1、分別利用本實驗室構(gòu)建的兩種酶重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Ecoli.BL21,獲得兩種工程菌,命名為TM1525工程菌和TM1201工程菌。2、利用IPTG誘導表達、SDS-PAGE電泳分析、Western blot等方法分析表達情況,并優(yōu)化了工程菌表達條件。3、利用生物信息學軟件分析兩種酶的理化性質(zhì),采用Ni-NTA... 

【文章來源】:東華大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:78 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

海棲熱袍菌兩種嗜熱酶基因工程菌發(fā)酵條件優(yōu)化


纖維素的分子結(jié)構(gòu)

工程菌,樣品,鄰硝基酚,分析表


活= (E(OD)×1000000)/(0.777×10×10)收值;系數(shù);L 鄰硝基酚的吸收值;min)(g)純化與酶活性質(zhì)分析表達情況凝膠電泳檢測誘導前后的菌液制樣并采用 12%的 SDS-PA

蛋白免疫印跡,樣品,形式分析,誘導條件


圖 3-2 TM1525 蛋白免疫印跡檢測M:marker 1:誘導后樣品道1與Marker對比可知,在32kDa處有顯著清成功表達。菌的誘導條件優(yōu)化形式分析種環(huán)境中的 TM1525 工程菌,取各自破碎后上 檢測表達形式。結(jié)果如下圖 3-3 與 3-4 所示

【參考文獻】:
期刊論文
[1]極端嗜熱微生物及其高溫適應機制的研究進展[J]. 曾靜,郭建軍,邱小忠,王賢卓,袁林.  生物技術(shù)通報. 2015(09)
[2]嗜冷酶的特性及其在食品工業(yè)上的應用[J]. 王繼蓮,魏云林,李明源.  食品工業(yè)科技. 2014(09)
[3]響應面法優(yōu)化芽孢桿菌25-2產(chǎn)纖維素酶發(fā)酵條件[J]. 胡麗娟,薛高尚,盧向陽,田云.  釀酒科技. 2012(04)
[4]極端環(huán)境下的微生物[J]. 金黎明.  生物學教學. 2010(04)
[5]植物內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶基因研究進展[J]. 柴國華,付先虎,白澤濤,黃軍艷,劉勝毅.  中國農(nóng)業(yè)科技導報. 2009(05)
[6]β-半乳糖苷酶研究進展[J]. 張莉,李慶章,田雷.  東北農(nóng)業(yè)大學學報. 2009(07)
[7]耐熱β-半乳糖苷酶基因在大腸桿菌中的表達及酶學性質(zhì)研究[J]. 龔月生,劉錦妮,王晶,楊明明,袁新宇.  西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版). 2008(10)
[8]纖維素酶的研究進展與發(fā)展趨勢[J]. 顧方媛,陳朝銀,石家驥,錢世鈞.  微生物學雜志. 2008(01)
[9]纖維素化學研究進展[J]. 葉代勇,黃洪,傅和青,陳煥欽.  化工學報. 2006(08)
[10]嗜熱菌XZ2K2葡聚糖蔗糖酶基因的克隆與表達[J]. 蘇龍,韋宇拓,黃日波.  化學與生物工程. 2006(07)

碩士論文
[1]海棲熱袍菌中嗜熱酶基因的克隆及發(fā)酵條件優(yōu)化[D]. 梅旭旭.東華大學 2017
[2]海棲熱袍菌葡聚糖內(nèi)切酶的克隆表達及酶學活性研究[D]. 左萬兵.江蘇大學 2016



本文編號:3544843

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