重組人干擾素α2b（rh IFNα2b）是最早運(yùn)用基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)量產(chǎn)的細(xì)胞因子之一,臨床上主要用于急慢性病毒性肝炎（乙型、丙型等）、尖銳濕疣、白血病、淋巴瘤、艾滋病相關(guān)性卡波濟(jì)氏肉瘤、惡性黑色素瘤等的治療。但因其用藥間隔短,很多研究人員致力于開發(fā)長效干擾素制劑,聚乙二醇修飾技術(shù)是解決蛋白質(zhì)藥物半衰期短的有效手段之一。本學(xué)位論文采用分子量20KD的單甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯（m PEG-Succinimidyl Carbonate,m PEG-SC）對rh IFNα2b進(jìn)行修飾,開發(fā)了能夠獲取高純度聚乙二醇化重組人干擾素α2b（PEG-rh IFNα2b）的制備方法,并對所獲產(chǎn)品進(jìn)行了理化性質(zhì)、生物學(xué)活性、穩(wěn)定性等質(zhì)量研究。（1）聚乙二醇化重組人干擾素α2b（PEG-rh IFNα2b）的制備和純化。采用DOE試驗(yàn)設(shè)計,優(yōu)化p H、投料比、rh IFNα2b濃度等參數(shù),確定PEG-rh IFNα2b的制備工藝;以離子交換層析結(jié)合凝膠過濾層析純化目標(biāo)物。最優(yōu)的工藝為:修飾反應(yīng)在p H7.0、溫度2～8℃、時間約4小時、rh IFNα2b濃度為1.8mg/ml～2.7mg/ml、投料... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PEG-rhIFNα2b含量與rhIFNα2b濃度、投料比的等值線圖

第二章聚乙二醇化重組人干擾素α2b制備工藝研究21PEG-rhIFNα2b含量與rhIFNα2b濃度、pH的等值線圖見圖2.2所示。圖2.2PEG-rhIFNα2b含量與rhIFNα2b濃度、pH的等值線圖Fig2.2IsogramofPEGrhIFNα2bcontent,rhIFNα2bconcentrationandpHPEG-rhIFNα2b含量與pH、投料比的等值線圖見圖2.3所示。圖2.3PEG-rhIFNα2b含量與pH、投料比的等值線圖Fig2.3IsogramofPEGrhIFNα2bcontent,pHandfeedratioPEG-rhIFNα2b含量主效應(yīng)圖見圖2.4所示。

合肥工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文26能夠被去除，收集的洗脫產(chǎn)物中主要為PEG-IFNα2b，還有少量PEG-IFNα2b寡聚體和極少量未被修飾的IFNα2b。目標(biāo)蛋白再經(jīng)超濾濃縮后經(jīng)凝膠過濾能獲得滿意的純化效果，聚乙二醇化重組人干擾素α2b純度在95%以上。詳見圖2.10、圖2.11、圖2.12、圖2.13.圖2.10聚乙二醇化重組人干擾素α2b(2017001Y)SP層析圖譜Fig2.10SPchromatogramofPEG-rhIFNα2b(2017001Y)由2.10可知，在洗脫液流量達(dá)到700、780和890mL時，出現(xiàn)3個明顯的蛋白吸收峰。收集出現(xiàn)吸收峰的3段洗脫液，濃縮后進(jìn)行SephacrylS-300凝膠過濾層析，層析圖譜見圖2.11。


本文編號：3500351