L-天冬酰胺酶（L-Asparaginase,EC 3.5.1.1,L-ASNase）是一種水解酶,能夠?qū)-天冬酰胺脫去氨基生成L-天冬氨酸和氨。該酶具有抗腫瘤活性,在食品和醫(yī)藥等領域應用十分廣泛。本研究以一株能夠分泌L-ASNase的重組枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis/ASNΔ25/B2為生產(chǎn)菌株,對重組L-ASNase發(fā)酵、提取和穩(wěn)定化進行研究。主要研究結(jié)果如下:（1）搖瓶發(fā)酵優(yōu)化提高重組L-ASNase產(chǎn)量采用單因素實驗考察了培養(yǎng)條件對菌體生長和產(chǎn)酶的影響,初始pH影響較大,最適初始pH為7.5。然后使用神經(jīng)網(wǎng)絡算法對其發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化。首先通過單因素實驗和Plackett-Burman實驗篩選顯著因素,再進行中心組合實驗建立實驗數(shù)據(jù)樣本,最后利用JMP10.0建立神經(jīng)網(wǎng)絡模型優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基組成。經(jīng)優(yōu)化,獲得最佳培養(yǎng)基組成如下:蔗糖65 g·L^-1、酵母蛋白胨28 g·L^-1、玉米漿11 g·L^-1、KH₂PO₄ 11.5 g·L^-1

【文章來源】：江南大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

L-ASNase催化機制Fig.1-1ThecatalyticmechanismofL-ASNase

oC；進樣體積：10 μL。發(fā)酵液 12000 r·min-1離心 10 min 后，取適量上清液液用 0.22 μm 濾膜過濾。最后將該樣品檢測出的峰出發(fā)酵液中蔗糖濃度。稱取 0.75 g 蔗糖標準樣品，用超純水溶解定容至 25分別稀釋至不同濃度的蔗糖標準溶液，用 HPLC 測品濃度（g·L-1）為縱坐標，繪制蔗糖標準曲線并得的計算[60, 61]比速率計算等使用 Origin 軟件處理。膠電泳分析 30 μL 樣品和 10 μL Loading buffer，混勻后 70℃處加入適量 20×mops 緩沖液，加入蛋白質(zhì)分子量標準 1 h。具體操作參考說明書。發(fā)酵液

第三章 結(jié)果與討論第三章 結(jié)果與討論平重組 B. subtilis 產(chǎn) L-天冬酰胺酶發(fā)酵優(yōu)化B. subtilis 培養(yǎng)條件優(yōu)化生長曲線的確定于不同的生長階段，其生理活性差異較大。選擇不同時期的種子，接種后也較大。如果種子過嫩，將會導致遲滯期延長。而如果種子過老，則可能降。處于對數(shù)生長期的種子，生長迅速，活力較高，接種后能很快適應新tilis/ASNΔ25/B2 的種子生長曲線如圖 3-1 所示，6~10 h 為對數(shù)生長期。因~10 h 的種子進行接種發(fā)酵培養(yǎng)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于神經(jīng)網(wǎng)絡對枯草芽孢桿菌富硒過程的建模研究[J]. 周夢舟,吳珊,柳念,汪超,徐寧,胡勇,史文博,李冬生.  中國食品學報. 2016(12)
[2]水處理絮凝劑的研究現(xiàn)狀[J]. 楊博,孫賓賓.  合成材料老化與應用. 2016(05)
[3]耐有機溶劑α-葡萄糖苷酶的補料分批發(fā)酵研究[J]. 唐群芳,李江華,劉龍,堵國成,陳堅.  食品與生物技術學報. 2016(01)
[4]兩階段攪拌轉(zhuǎn)速控制策略發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸[J]. 李佳偉,劉龍,李江華,堵國成,陳堅,孫福新.  食品與生物技術學報. 2014(02)
[5]有機氮源對谷氨酸棒桿菌發(fā)酵L-纈氨酸的影響[J]. 徐慶陽,孫家凱,吳曉嬌,王晶,謝希賢,陳寧.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2012(05)
[6]黑曲霉DL-116高溫乳糖酶復合熱穩(wěn)定劑的研究[J]. 李寧,趙珊,于宏偉,郭潤芳,賈英民.  食品科技. 2010(06)
[7]絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選及其絮凝活性的測定[J]. 楊耿,阮紅,羅晶.  浙江大學學報(理學版). 2008(02)
[8]一些蛋白質(zhì)和多肽對谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶熱穩(wěn)定性的影響[J]. 榮紹豐,高紅亮,常忠義,柏俊華,瞿偉菁.  食品工業(yè)科技. 2006(12)
[9]溶氧對L-天冬酰胺酶發(fā)酵的影響及其控制[J]. 劉紅,蔡紹皙,潘紅春.  中國生物制品學雜志. 2003(06)

碩士論文
[1]海洋黑曲霉固態(tài)發(fā)酵耐鹽纖維素酶的培養(yǎng)條件優(yōu)化及粗酶制劑的制備[D]. 曲麗麗.浙江大學 2017
[2]枯草芽孢桿菌L-天冬酰胺酶的分子改造及發(fā)酵優(yōu)化[D]. 龍水清.江南大學 2016
[3]L-天冬酰胺酶在Bacillus subtilis WB600中的表達與發(fā)酵過程優(yōu)化研究[D]. 陳璇.江南大學 2015
[4]Bacillus subtilis B11-06 L-天冬酰胺酶的表達、發(fā)酵優(yōu)化及酶學性質(zhì)研究[D]. 賈明媚.江南大學 2014
[5]鏈霉菌發(fā)酵液固液分離過程研究[D]. 王俠.河北科技大學 2011
[6]高溫乳糖酶高產(chǎn)菌株發(fā)酵條件優(yōu)化及酶制劑的研究[D]. 趙珊.河北農(nóng)業(yè)大學 2008
[7]重組枯草芽孢桿菌生產(chǎn)角質(zhì)酶發(fā)酵條件優(yōu)化[D]. 張芙華.江南大學 2008
[8]發(fā)酵液中1，3-丙二醇的分離提取工藝的研究[D]. 魯詩鋒.大連理工大學 2006



本文編號：3500446