L-天冬酰胺酶（L-Asparaginase,EC 3.5.1.1,L-ASNase）是一種水解酶,能夠?qū)-天冬酰胺脫去氨基生成L-天冬氨酸和氨。該酶具有抗腫瘤活性,在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用十分廣泛。本研究以一株能夠分泌L-ASNase的重組枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis/ASNΔ25/B2為生產(chǎn)菌株,對(duì)重組L-ASNase發(fā)酵、提取和穩(wěn)定化進(jìn)行研究。主要研究結(jié)果如下:（1）搖瓶發(fā)酵優(yōu)化提高重組L-ASNase產(chǎn)量采用單因素實(shí)驗(yàn)考察了培養(yǎng)條件對(duì)菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)酶的影響,初始pH影響較大,最適初始pH為7.5。然后使用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)算法對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。首先通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)篩選顯著因素,再進(jìn)行中心組合實(shí)驗(yàn)建立實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)樣本,最后利用JMP10.0建立神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基組成。經(jīng)優(yōu)化,獲得最佳培養(yǎng)基組成如下:蔗糖65 g·L^-1、酵母蛋白胨28 g·L^-1、玉米漿11 g·L^-1、KH₂PO₄ 11.5 g·L^-1

【文章來(lái)源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

L-ASNase催化機(jī)制Fig.1-1ThecatalyticmechanismofL-ASNase

oC；進(jìn)樣體積：10 μL。發(fā)酵液 12000 r·min-1離心 10 min 后，取適量上清液液用 0.22 μm 濾膜過(guò)濾。最后將該樣品檢測(cè)出的峰出發(fā)酵液中蔗糖濃度。稱取 0.75 g 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)樣品，用超純水溶解定容至 25分別稀釋至不同濃度的蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，用 HPLC 測(cè)品濃度（g·L-1）為縱坐標(biāo)，繪制蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線并得的計(jì)算[60, 61]比速率計(jì)算等使用 Origin 軟件處理。膠電泳分析 30 μL 樣品和 10 μL Loading buffer，混勻后 70℃處加入適量 20×mops 緩沖液，加入蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn) 1 h。具體操作參考說(shuō)明書(shū)。發(fā)酵液

第三章 結(jié)果與討論第三章 結(jié)果與討論平重組 B. subtilis 產(chǎn) L-天冬酰胺酶發(fā)酵優(yōu)化B. subtilis 培養(yǎng)條件優(yōu)化生長(zhǎng)曲線的確定于不同的生長(zhǎng)階段，其生理活性差異較大。選擇不同時(shí)期的種子，接種后也較大。如果種子過(guò)嫩，將會(huì)導(dǎo)致遲滯期延長(zhǎng)。而如果種子過(guò)老，則可能降。處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的種子，生長(zhǎng)迅速，活力較高，接種后能很快適應(yīng)新tilis/ASNΔ25/B2 的種子生長(zhǎng)曲線如圖 3-1 所示，6~10 h 為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。因~10 h 的種子進(jìn)行接種發(fā)酵培養(yǎng)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3500446