發(fā)布時(shí)間：2021-08-30 12:07

　　環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（Cyclodextrin Glycosyltransferase,CGTase）是一種多功能酶,廣泛應(yīng)用于2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗壞血酸等高附加值衍生物的制備,Bacillus stearothermophilus NO2來(lái)源的α/β-CGTase憑借其優(yōu)秀的轉(zhuǎn)糖基作用和高特異性,成為工業(yè)生產(chǎn)中使用最廣泛的酶種之一�？莶菅挎邨U菌（Bacillus subtilis,B.subtilis）是一種食品安全菌株,實(shí)驗(yàn)室前期通過自然界篩選和基因組定向改造,獲得高效表達(dá)外源蛋白的宿主菌B.subtilis WSH11。本研究通過篩選啟動(dòng)子、信號(hào)肽和蛋白質(zhì)分子改造提高α/β-CGTase在B.subtilis WSH11中的表達(dá)水平,并考察α/β-CGTase野生型和突變體的酶學(xué)性質(zhì),最后定向改造表達(dá)宿主B.subtilis WSH11。主要研究結(jié)果如下:（1）以質(zhì)粒pHY300PLK為骨架,構(gòu)建α/β-CGTase在B.subtilis WSH11表達(dá)系統(tǒng)中重組表達(dá)的質(zhì)粒。為了提高α/β-CGTase的表達(dá)量,考察9個(gè)單啟動(dòng)子對(duì)α/β-CGTase表達(dá)的影響。經(jīng)搖瓶發(fā)... 

【文章來(lái)源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

幾種脂肽的結(jié)構(gòu)

圖 1-3 有序/無(wú)序蛋白質(zhì)組分簡(jiǎn)況[68]Fig. 1-3 Order/disorder composition profile無(wú)序蛋白質(zhì)的氨基酸組分進(jìn)行分析外，Williams R M等對(duì)電荷、柔韌性指數(shù)、螺旋鏈傾向以及氨基酸的組合等也種不同性質(zhì)的蛋白進(jìn)行分析后，新的促折疊氨基酸和不折疊到阻礙折疊的順序排列：W，F(xiàn)，Y，I，M，L，，Q，K，S，E，P[74, 75]。性質(zhì)與蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)探究胞外蛋白質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì) N 末端氨基酸組成的分析 B. subtilis 的 sec 途徑分泌蛋白和細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì)的白 N 端中不折疊氨基酸的含量為 59.87%，明顯高于細(xì)比例 45.34%。說(shuō)明胞外蛋白質(zhì)的 N 端以不折疊氨基酸白質(zhì)肽鏈與細(xì)胞內(nèi)各種輔因子結(jié)合，利于蛋白質(zhì)運(yùn)輸；疊氨基酸為主，易形成高級(jí)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致不利于蛋白質(zhì)之外[76]。

pHYα/βCGTn7530bpTcRrepBterminat ororiAmpRp15APnα/β-CGTasepHYα/βCGT17604bpTcRrepBterminat ororiAmpRp15APamyQα/β-CGTase+啟動(dòng)子平末端連接n2：PamyQ3： PaprE4： PgsiB5： PhpaII6： PnprE7： Psrf8： Pxyl9： Pxyl’圖 3-2 重組質(zhì)粒 pHYα/βCGTn 的構(gòu)建過程Fig. 3-2 The construction of expression pHYα/βCGTn vector

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多黏芽孢桿菌產(chǎn)ɑ-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物特異性研究[J]. 王琰,李皎,楊國(guó)武,王軍,鄧媛,萬(wàn)一.  中國(guó)食品添加劑. 2017(02)
[2]信號(hào)肽及化學(xué)通透劑對(duì)環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶胞外分泌的影響[J]. 蔡海松,林曉栩,郭永華,陳龍軍,張慧,邱宏端,林新堅(jiān),陳濟(jì)琛.  微生物學(xué)通報(bào). 2017(03)
[3]細(xì)菌麥芽糖淀粉酶在枯草芽孢桿菌中的誘導(dǎo)型異源表達(dá)[J]. 楊韻霏,李由然,張梁,李贏,顧正華,丁重陽(yáng),石貴陽(yáng).  微生物學(xué)通報(bào). 2017(02)
[4]無(wú)痕敲除法構(gòu)建食品安全級(jí)枯草芽孢桿菌無(wú)芽孢菌株[J]. 張明俐,柳鵬福,史吉平,曾勇.  食品工業(yè)科技. 2016(14)
[5]信號(hào)肽對(duì)Bacillus subtilis表達(dá)環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的影響[J]. 毛婷,李江華,劉龍,堵國(guó)成,陳堅(jiān).  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2016(02)
[6]環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的釀酒酵母表面展示及其生產(chǎn)2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗壞血酸[J]. 熊艷軍,宿玲恰,王蕾,吳敬,陳晟.  微生物學(xué)報(bào). 2015(10)
[7]枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)及其啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J]. 余小霞,田健,劉曉青,伍寧豐.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(02)
[8]枯草芽孢桿菌OKB105產(chǎn)生的surfactin防治煙草花葉病毒病及其機(jī)理研究[J]. 任鵬舉,謝永麗,張巖,伍輝軍,高學(xué)文.  中國(guó)生物防治學(xué)報(bào). 2014(02)
[9]食品級(jí)枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的最新研究進(jìn)展[J]. 王金斌,陳大超,李文,蔣瑋,李鵬,張倩倩,唐雪明.  上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(01)
[10]天然無(wú)序蛋白質(zhì):序列-結(jié)構(gòu)-功能的新關(guān)系[J]. 黃永棋,劉志榮.  物理化學(xué)學(xué)報(bào). 2010(08)

博士論文
[1]枯草芽孢桿菌及鏈霉菌表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及應(yīng)用研究[D]. 關(guān)成冉.江南大學(xué) 2016
[2]β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在枯草桿菌中的分泌表達(dá)及其熱穩(wěn)定性研究[D]. 李才明.江南大學(xué) 2014
[3]枯草芽孢桿菌中Sec分泌途徑底物特性及非經(jīng)典分泌途徑的研究[D]. 王光強(qiáng).江南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]Bacillus stearothermophilus環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在短小芽孢桿菌中的重組表達(dá)、發(fā)酵優(yōu)化及應(yīng)用研究[D]. 范博望.江南大學(xué) 2016



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