發(fā)布時(shí)間：2021-08-02 08:04

　　L-鳥氨酸是一種堿性氨基酸,其對人體具有保肝、護(hù)肝、治療肝臟疾病、抗癌和刺激人體生長激素分泌等作用。通常依靠微生物發(fā)酵的方式來進(jìn)行L-鳥氨酸的產(chǎn)業(yè)鏈合成。其中,谷氨酸棒桿菌是被普遍用于生產(chǎn)各種氨基酸及其衍生物的發(fā)酵育種的優(yōu)勢菌種,同時(shí)也是用于合成L-鳥氨酸的主流菌種。然而利用微生物發(fā)酵法合成L-鳥氨酸需要消耗大量的底物葡萄糖,提取壓力增加,并且在耕地面積不斷減少,這個(gè)問題所造成的負(fù)面影響與日俱增。因此,探尋葡萄糖的可替代碳源成為眼下研究的熱點(diǎn)。木質(zhì)纖維素是來源廣泛的可重復(fù)產(chǎn)生的自然資源之一,利用酸解或酶解的方法可將其轉(zhuǎn)化為還原性糖,其中木糖與葡萄糖在所有還原糖中占據(jù)的比例最大。本文在已有重組谷氨酸棒桿菌SO26的基礎(chǔ)上,借助代謝工程策略構(gòu)建能同時(shí)利用葡萄糖和木糖進(jìn)行發(fā)酵合成L-鳥氨酸的菌株。主要研究內(nèi)容包括:（1）將來自于野油菜單胞菌的木糖異構(gòu)酶及木酮糖激酶的xylAB編碼基因克隆至穿梭表達(dá)載體pXMJ19中,導(dǎo)入重組谷氨酸棒桿菌SO26內(nèi),對IPTG的最佳添加時(shí)間與濃度進(jìn)行優(yōu)化。研究結(jié)果顯示初始添加IPTG終濃度為0.5 mM時(shí)較其它條件所添加的濃度獲得了最大的L-鳥氨酸產(chǎn)量,木糖消... 

【文章來源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?３谷氨酸棒桿菌合成Ｌ－鳥氨酸代謝途徑示意圖??ＡｒｇＢ：?Ｎ－乙酰谷氨酸激酶，ＡｒｇＣ：?Ｎ－乙�；鶄�(gè)谷氨酰磷酸還原酶，ＡｒｇＤ：?Ｎ－乙酰鳥氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，??：－ｒＪ：

ｈｙｄｅ??１，５－Ｄｉａｍｉｎｏｐｅｎｔａｎｅ?ｉ?｜?ＫＳＨ??聱?（？＝＝？）?目??Ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ?、：香?Ａｒｇｉｎｉｎｅ?ｆ?＼??ｏ？ｓ＾〇?Ｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ?Ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ?［?ＴＣＡ?Ｃｙｃｌｅ）?ｃｐｓ＾〇??＾?ＧＡＢＡ?ｉ４＾％?Ｇｌｕｔａｍａｔｅ?＾?ｌ?Ｊ?＾??錄?Ｅｔｈａｎｏｌ?ｖＣ?＾ｃｃｉｎａｉｅ?Ｖ一＾７?參??Ｃ．?ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ??，歷醒證麗麗歷ｆｆｌｉｌＭ腿麗■歷腿ｉｆ��？！醒繼歷費(fèi)??圖１．４谷氨酸棒桿菌中木糖的主要代謝通路［７８］??Ｘｌ（ＸｙｌＡ）：木糖異構(gòu)酶，ＸＬＫ（ＸｙｌＢ）：木酮糖激酶，ＴＫＴ：編碼轉(zhuǎn)酮醇酶，ＸＲ：木糖還原酶，??ＸＬＤＨ：木糖脫氫酶，ＸＬＳ：木糖醇內(nèi)酯酶，ＸＤＹ：木糖酸鹽脫水酶，ＫＤＹ：２－酮－３－脫氧－Ｄ－木糖酸脫水??酶，ＫＳＨ：?ａ－酮戊二酸半醛脫氫酶，ＡＬＤ：醛縮酶，ＡｒａＥ：戊糖轉(zhuǎn)運(yùn)子，ＸｙｌＥ：木糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白??Ｆｉｇ．?１．４?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｍａｉｎ?ｕｓｅ?ｏｆ?ｘｙｌｏｓｅ?ｉｎ?Ｃ．?ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ??ＸＩ（ＸｙｌＡ）：?Ｘｙｌｏｓｅ?ｉｓｏｍｅｒａｓｅ，?ＸＬＫ（ＸｙｌＢ）：?Ｘｙｌｕｌｏｓｅ?ｋｉｎａｓｅ，?ＴＫＴ：?Ｔｒａｎｓｋｅｔｏｌａｓｅ，?ＸＲ：?Ｘｙｌｏｓｅ??ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，?ＸＬＤＨ：?Ｘｙｌｏｓｅ?ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，?ＸＬＳ：?Ｘｙｌｉｔｏｌ?ｌａｃｔｏｎｅ，?ＸＤＹ：?Ｘｙｌａｔｅ?ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ，?ＫＤＹ：??２－ｋｅｔｏ－３－ｄｅｏｘｙ－Ｄ－Ｘｙｌａｔｅ?ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ，?ＫＳＨ：?ａ－Ｋｅ

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]基于啟動序列替換提高L-鳥氨酸產(chǎn)量的研究[D]. 任立泉.華東理工大學(xué) 2019
[2]木糖異構(gòu)酶基因xylA在谷氨酸棒桿菌中的克隆與表達(dá)研究[D]. 葉菁.華中科技大學(xué) 2013



本文編號：3317207