腎臟是人體內(nèi)重要的器官,在維持人體內(nèi)部環(huán)境的動(dòng)態(tài)平衡方面起到至關(guān)重要的作用,在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)腎功能受損與藥物的使用有關(guān)。隨著人們對(duì)于中草藥研究日益深入,中草藥相關(guān)制劑的安全問題在引起廣泛關(guān)注的同時(shí)也制約著中草藥的應(yīng)用,同時(shí)臨床上案例顯示中草藥引起的腎損傷是其毒性的主要體現(xiàn)。本論文基于微流控芯片平臺(tái)設(shè)計(jì)了一種腎微流控芯片,該計(jì)芯片主要由上下兩層PC（聚碳酸酯）板、四層（濃度梯度產(chǎn)生層、定位層、模擬尿液層、調(diào)節(jié)層）材質(zhì)為PDMS（聚二甲基硅氧烷）和一層（模擬血液層）材質(zhì)為PMMA（聚甲基丙烯酸甲酯）的芯片層通過4個(gè)螺絲,8個(gè)螺母固定。同時(shí)芯片內(nèi)以10μm聚碳酸酯多孔膜分離模擬血液和尿液層,并提供細(xì)胞生長(zhǎng)平面,以磨平針頭的一次性輸液針作為進(jìn)出液口管路,以注射泵作為培養(yǎng)液流動(dòng)培養(yǎng)動(dòng)力設(shè)備,通過改變進(jìn)出液口位置和接種細(xì)胞種類可改變芯片類型。此外,本芯片內(nèi)具有8個(gè)平行通道,可同時(shí)檢測(cè)8種不同濃度的化合物濃度對(duì)于細(xì)胞的作用。芯片上細(xì)胞主要是提取的大鼠原代腎足細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和微血管內(nèi)皮細(xì)胞,并按照一定的比例和生理結(jié)構(gòu)將三種細(xì)胞接種在芯片上,通入模擬血液和模擬尿液（培養(yǎng)基）來構(gòu)建腎臟微環(huán)境,根據(jù)不... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 緒論
    1.1 腎臟概述
    1.2 藥物引起的腎損傷
        1.2.1 急性腎損傷
        1.2.2 中草藥引起的腎毒性
    1.3 腎毒性篩選模型
        1.3.1 傳統(tǒng)體外模型
        1.3.2 復(fù)雜微結(jié)構(gòu)體外模型
    1.4 微流控芯片簡(jiǎn)介
        1.4.1 微流控芯片概念
        1.4.2 腎器官芯片舉例
        1.4.3 未來的發(fā)展方向和前景
    1.5 本論文研究目的和內(nèi)容
2 實(shí)驗(yàn)部分
    2.1 實(shí)驗(yàn)所需用耗材、設(shè)備
        2.1.1 腎芯片制作所需要的實(shí)驗(yàn)耗材、試劑、設(shè)備
        2.1.2 原代大鼠腎細(xì)胞獲取及純化培養(yǎng)所需要的耗材、試劑、設(shè)備
        2.1.3 腎芯片的運(yùn)行涉及的耗材、試劑及設(shè)備
        2.1.4 腎毒性檢測(cè)所用到的耗材、試劑及設(shè)備
    2.2 芯片的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)與制作方法
        2.2.1 芯片結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)
        2.2.2 芯片掩膜設(shè)計(jì)
        2.2.3 單晶硅片前處理
        2.2.4 光刻膠前處理
        2.2.5 甩光刻膠
        2.2.6 對(duì)光刻膠進(jìn)行曝光
        2.2.7 固化通道
        2.2.8 制作模版圍欄
        2.2.9 PDMS層制作方法
        2.2.10 PMMA層制作方法
        2.2.11 打孔
        2.2.12 封接
    2.3 大鼠原代腎細(xì)胞獲取及純化培養(yǎng)方法
        2.3.1 原代細(xì)胞培養(yǎng)液配制
        2.3.2 其他需要的試液配制
        2.3.3 原代腎細(xì)胞提取實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 原代腎細(xì)胞純化實(shí)驗(yàn)
        2.3.5 血管管周內(nèi)皮細(xì)胞的凍存方法
        2.3.6 血管管周內(nèi)皮細(xì)胞的復(fù)蘇方法
    2.4 芯片的組裝及運(yùn)行方法
        2.4.1 芯片運(yùn)行液制備
        2.4.2 濃度梯度層表征實(shí)驗(yàn)
        2.4.3 腎單位芯片組裝和運(yùn)行實(shí)驗(yàn)
        2.4.4 腎小管、腎小球芯片組裝和運(yùn)行實(shí)驗(yàn)
    2.5 腎小管芯片構(gòu)建及評(píng)價(jià)
        2.5.1 孔板中商陸皂苷甲、蝙蝠葛堿濃度對(duì)腎細(xì)胞的損傷評(píng)價(jià)
        2.5.2 腎小管芯片運(yùn)行操作
        2.5.3 順鉑對(duì)腎細(xì)胞的損傷實(shí)驗(yàn)
        2.5.4 中草藥有效成分對(duì)腎細(xì)胞的損傷實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果與討論
    3.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)探討
        3.1.1 腎芯片設(shè)計(jì)探討
        3.1.2 大鼠原代腎細(xì)胞的提取條件優(yōu)化
    3.2 腎單位芯片表征
        3.2.1 芯片實(shí)驗(yàn)原理
        3.2.2 芯片濃度梯度的表征
    3.3 腎芯片用于中藥毒性評(píng)價(jià)
        3.3.1 孔板條件下腎細(xì)胞損傷結(jié)果探討
        3.3.2 腎小管芯片上不同濃度順鉑對(duì)腎細(xì)胞的損傷程度探討
        3.3.3 腎小管芯片上不同濃度商陸皂苷甲對(duì)腎細(xì)胞的損傷
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]應(yīng)用于細(xì)胞間相互作用的微流控芯片技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 黃明宇,冒衛(wèi)星,張華麗.  納米技術(shù)與精密工程. 2016(06)
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[6]商陸皂苷甲致腎細(xì)胞毒性的研究[J]. 周倩,姚廣濤,金若敏,謝家駿.  世界中醫(yī)藥. 2014(02)
[7]蝙蝠葛堿體外肝腎細(xì)胞毒性的初步研究[J]. 周倩,金若敏,姚廣濤.  中國(guó)藥物警戒. 2012(10)
[8]北豆根毒性研究進(jìn)展[J]. 孫蓉,王晨.  中國(guó)藥物警戒. 2009(09)

博士論文
[1]微流控仿生腎單位芯片的構(gòu)建及功能研究[D]. 曲玥陽.大連理工大學(xué) 2018

碩士論文
[1]基于肝器官芯片的中草藥成分肝毒性評(píng)價(jià)[D]. 蔡樂.大連理工大學(xué) 2019



本文編號(hào)：3130032