葡激酶（SAK）由于具有良好的溶解纖維蛋白的活性,可用于冠狀動脈血栓和急性心肌梗塞的治療。然而,SAK在體內(nèi)的循環(huán)半衰期很短,需要重復(fù)給藥才能維持其生理作用,這將給患者帶來極大的痛苦;此外,SAK具有較強的免疫原性、穩(wěn)定性較差,這些都限制了SAK的臨床應(yīng)用。聚乙二醇（PEG）修飾和多糖（PS）修飾可以延長SAK的循環(huán)半衰期,并降低其免疫原性,但同時會降低SAK的生物活性。為了解決以上問題,本論文選擇去掉N-末端前10位氨基酸殘基,且C-末端引入Gly-Gly-Cys的重組SAK作為研究對象,以降低野生型SAK的免疫原性,且能實現(xiàn)遠離SAK活性區(qū)域的定點修飾。本論文設(shè)計采用8-arm PEG定點修飾SAK,探索使SAK多聚化的修飾方法對SAK藥代動力學和生物活性等性質(zhì)的影響。另外,采用低分子量的PEG為連接橋,介導阿拉伯半乳聚糖（AG）修飾SAK,探索該修飾方法對SAK免疫原性、藥代動力學和生物活性等性質(zhì)的影響。采用8-arm PEG-MAL 10 kDa定點修飾SAK的C-末端巰基,并用兩種不同的線性PEG修飾劑mPEG-MAL 10 kDa和MAL-PEG-MAL 10 kDa定點修... 

【文章來源】：中國科學院大學(中國科學院過程工程研究所)北京市

【文章頁數(shù)】：154 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．８?ＰＥＧ的形狀對蛋白的影響ｌ４７Ｉ??Ｆｉｇｕｒｅ?１．８?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＰＥＧ?ｓｈａｐｅ?ｏｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ??

?４００??Ｖｏｌｕｍｅ?（ｍＬ）??圖２．３陰離子交換層析第一次純化ＳＡＫ??Ｆｉｇｕｒｅ?２．３?Ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＡＫ?ｂｙ?ａｎｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ??ｋＤａ?１?２?３?４?５?６?７?８?９??観?ｉＭ??：廠，囑爾?????．?八ｙ?濟■ｎ、?ｗ??圖２．４?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鑒定第一次純化的ＳＡＫ??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｐｕｒｅｄ?ＳＡＫ??Ｌａｎｅ?１：?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｌａｎｅ?２：?ＳＡＫ?ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ?ｂｅｆｏｒｅ?ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；?Ｌａｎｅ?３：??Ｐｅｎｅｔｒａｎｔ?７４?ｍＬ；?Ｌａｎｅ?４：?Ｐｅｎｅｔｒａｎｔ?１００?ｍＬ；?Ｌａｎｅ?５：?Ｐｅｎｅｔｒａｎｔ?１３５?ｍＬ；?Ｌａｎｅ?６：??Ｐｅｎｅｔｒａｎｔ?１５５－２１０?ｍＬ；?Ｌａｎｅ?７：?Ｐｅｎｅｔｒａｎｔ?３８９?ｍＬ；?Ｌａｎｅ?８：?Ｅｌｕｅｎｔ?４０１?ｍＬ；?Ｌａｎｅ?９：??Ｅｌｕｅｎｔ?４１６?ｍＬ??重組ＳＡＫ的第二步凝膠過濾層析的純化結(jié)果如圖２．５所示。分段收取洗脫??液，進行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，電泳膠經(jīng)考染后，結(jié)果如圖２．６所示。對比兩個結(jié)果??可以看出，目標蛋白ＳＡＫ主要存在于１４５－１９０?ｍＬ的洗脫液中，收集此部分樣??品，得到精純的ＳＡＫ，收率約為９２％。對比標準蛋白Ｍａｒｋｅｒ可以看出，目標蛋??白分子量約為１５?ｋＤａ

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【參考文獻】：
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本文編號：2986625