親和配基是親和層析法分離蛋白的關(guān)鍵,而現(xiàn)有的蛋白A分離配基存在穩(wěn)定性差、價格昂貴等問題,而合成類的小分子親和配基存在著特異性差等問題。尋找可以替代蛋白A分離配基,兼具高選擇性、耐酸、堿洗滌再生的合成小分子親和配基一直是抗體純化分離行業(yè)的難點和重點。本研究中我們提出了一類新型配基結(jié)構(gòu),并開展了以下工作。首先通過可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移（RAFT）聚合方法合成了磺酸甜菜堿聚合物（pSBMA）,并通過進(jìn)一步反應(yīng)得到pSBMA的兩種衍生物,單端巰基的磺酸甜菜堿聚合物（pSBMA-SH）和單端砜基的磺酸甜菜堿聚合物（pSBMA-VS）。然后將兩性離子聚合物利用一步法和兩步法修飾到磁性納米粒子表面,得到了一步修飾的納米粒子（1S NPs）和兩步修飾的納米粒子（2S NPs）。以人免疫球蛋白（hIgG）和牛血清白蛋白（BSA）作為模型蛋白,利用1S NPs和2S NPs進(jìn)行蛋白質(zhì)靜態(tài)吸附實驗。結(jié)果顯示1S NPs表面呈現(xiàn)出對蛋白的抗吸附性能,2S NPs表面可以選擇性吸附hIgG。接著,以2S NPs作為分離介質(zhì),考察了分離介質(zhì)中二乙烯基砜（DVS）修飾時間、抗蛋白非特異性吸附鏈材料、抗蛋白非特異性吸附... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 前言
    1.2 親和層析法
        1.2.1 生物親和層析
        1.2.2 免疫親和層析
        1.2.3 金屬離子親和層析
        1.2.4 擬生物親和層析
    1.3 親和層析配基
        1.3.1 天然生物分子親和配基
        1.3.2 合成分子親和配基
    1.4 基于嗜硫作用的新型親和配基的設(shè)計與構(gòu)筑
    1.5 兩性離子聚合物
    1.6 可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合技術(shù)
    1.7 本論文研究目的及研究內(nèi)容
2 兩性離子聚合物修飾的磁性納米粒子的制備及表征
    2.1 引言
    2.2 實驗儀器與試劑
    2.3 實驗操作
        2.3.1 兩性離子聚合物及其衍生物的制備
        2.3.2 利用一步法和兩步法制備功能化的磁性納米材料
        2.3.3 核磁表征
        2.3.4 水相GPC分析
        2.3.5 磁性納米粒子表面膜電位表征
        2.3.6 磁性納米粒子水力學(xué)直徑表征
        2.3.7 X射線光電子能譜表征
    2.4 實驗結(jié)果與討論
        2.4.1 核磁表征
        2.4.2 水相GPC分析
        2.4.3 磁性納米粒子表面膜電位表征
        2.4.4 磁性納米粒子水力學(xué)直徑表征
        2.4.5 X射線光電子能譜表征
    2.5 小結(jié)
3 功能化的納米粒子抗體吸附行為的研究
    3.1 引言
    3.2 實驗儀器與試劑
    3.3 實驗操作
        3.3.1蛋白靜態(tài)吸附實驗
        3.3.2 不同修飾過程對蛋白吸附的影響
        3.3.3 二乙烯基砜不同修飾時間對抗體吸附的影響
        3.3.4 PEG和 pMPC修飾的磁性納米粒子抗體吸附性能對比
        3.3.5 不同鏈長的聚合物鏈對抗體吸附的影響
        3.3.6 磁性納米粒子尺寸對抗體吸附的影響
        3.3.7 溶液pH對抗體吸附的影響
        3.3.8 不同鹽種類和鹽濃度對抗體吸附的影響
        3.3.9 2S NPs的重復(fù)使用能力
        3.3.10 2S NPs從模擬血清中分離hIgG
        3.3.11 2S NPs從牛血清中分離hIgG
    3.4 實驗結(jié)果與討論
        3.4.1 不同修飾過程對抗體吸附的影響
        3.4.2 二乙烯基砜修飾時間對抗體吸附的影響
        3.4.3 PEG和 pMPC修飾的磁性納米粒子抗體吸附性能對比
        3.4.4 不同分子量的pSBMA鏈對抗體吸附的影響
        3.4.5 磁性納米粒子尺寸對抗體吸附的影響
        3.4.6 溶液pH對抗體吸附的影響
        3.4.7 不同鹽種類和鹽濃度對抗體吸附的影響
        3.4.8 2S NPs的重復(fù)使用能力
        3.4.9 2S NPs從模擬血清中分離hIgG
        3.4.10 2S NPs從牛血清中分離hIgG
    3.5 小結(jié)
4 基于BLI生物傳感技術(shù)的親和配基的研究
    4.1 引言
    4.2 實驗儀器與試劑
    4.3 實驗操作
        4.3.1 親和配基在Blitz傳感探頭表面上的固定
        4.3.2 BLI生物傳感器實驗
        4.3.3 基于BLI生物傳感器蛋白的等溫吸附曲線
        4.3.4 不同BSA濃度對hIgG的選擇性吸附影響
        4.3.5 BLI生物傳感器在牛血清中對hIgG的選擇性吸附影響
        4.3.6 利用BLI生物傳感技術(shù)探究親和配基重復(fù)使用能力
        4.3.7 親和配基和hIgG的相互作用位點研究
    4.4 實驗結(jié)果與討論
        4.4.1 基于BLI生物傳感器蛋白質(zhì)動態(tài)等溫吸附曲線
        4.4.2 不同BSA濃度對hIgG的選擇性吸附影響
        4.4.3 BLI生物傳感器在牛血清中對hIgG的選擇性吸附影響
        4.4.4 利用BLI生物傳感技術(shù)探究親和配基重復(fù)使用能力
        4.4.5 親和配基和hIgG的相互作用位點研究
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號：2900856