發(fā)布時(shí)間：2020-07-05 08:14

【摘要】：胃癌是世界上最常見(jiàn)的疾病之一,現(xiàn)已成為世界范圍內(nèi)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。在中國(guó),胃癌是癌癥相關(guān)死亡的第二大原因,且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前,治療胃癌多采用手術(shù)切除、化療或放療,但治療后5年內(nèi)的生存率仍然不足20%。腫瘤具有一定的適應(yīng)力且能對(duì)多種細(xì)胞毒性藥物產(chǎn)生抗性,這也是化療失敗的主要原因——多藥耐藥性(MDR)。將納米技術(shù)應(yīng)用于逆轉(zhuǎn)MDR的研究是當(dāng)今新藥研究的前沿課題,納米技術(shù)尋求使用直徑為1~100 nm的藥物輸送載體,其由幾種不同的材料組成,向癌細(xì)胞輸送抗癌藥物,并克服MDR。多西他賽(DTX)是在合成紫杉醇的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的中間產(chǎn)物,是美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局于1998年批準(zhǔn)上市的紫杉烷類(lèi)抗癌藥物。藤黃酸(GA)是一種具有籠狀氧雜蒽醌結(jié)構(gòu)的天然化合物,且是藤黃科植物藤黃樹(shù)分泌的有效成分之一。多項(xiàng)臨床前研究表明,GA對(duì)多種惡性腫瘤(包括實(shí)體和血液系統(tǒng)癌癥)具有抗癌特性,但對(duì)人體正常細(xì)胞具有耐藥性。GA能夠通過(guò)抑制survivin的表達(dá)來(lái)恢復(fù)胃癌細(xì)胞株對(duì)DTX的敏感性。GA還可以通過(guò)下調(diào)存活蛋白表達(dá)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡使人胃癌細(xì)胞對(duì)DTX敏感。在胃腸細(xì)胞中,GA通過(guò)抑制DTX誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因β-微管蛋白Ⅲ,tau和survivin的mRNA表達(dá),對(duì)其致敏作用至關(guān)重要。此外,由于DTX和GA水溶性很差,現(xiàn)有注射劑多利用輔助溶劑給藥,但助溶劑黏性大、具有溶血性,且在臨床實(shí)驗(yàn)中,多數(shù)患者會(huì)產(chǎn)生刺激性和過(guò)敏反應(yīng)。因此,開(kāi)發(fā)一種新的劑型,以提高DTX和GA在水中的溶解度,減少溶劑帶來(lái)的毒性和不良反應(yīng),同時(shí)GA協(xié)同DTX可以提高藥物療效,克服MDR。載體選擇牛血清白蛋白,因其具有更高的治療指數(shù)和安全性,相較于助溶劑能顯著降低不良反應(yīng),已成為近年來(lái)新型藥物傳遞系統(tǒng)研究的熱點(diǎn)。本研究首先考察了測(cè)定多西他賽和藤黃酸含量的體外高效液相色譜方法學(xué)。多西他賽的回歸方程為:Y=681547X-20446(R~2=0.9999),線性范圍為:4.404~22.02μg。藤黃酸的回歸方程為:Y=1.693×10~6X-3.076×10~6(R~2=0.9992),線性范圍為:4.004~20.02μg。各項(xiàng)參數(shù)與藥物的含量測(cè)定要求均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí),本實(shí)驗(yàn)對(duì)DTX和GA制劑的體外釋放度的進(jìn)行了研究,均為后續(xù)測(cè)定DTX和GA制劑的包封率和體外釋放度提供了可靠的依據(jù)。采用Nab~(TM) technology制得共載多西他賽和藤黃酸白蛋白納米粒(DTX-GA-BSA NPs)混懸劑。篩選最佳油相比為二氯甲烷:乙醇=2:1。利用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法篩選出最優(yōu)處方為BSA質(zhì)量濃度5 g·L~(-1),水油體積比(水相與油相的體積比)=1:17,藥載比(藥物與載體的質(zhì)量比)=1:10。制得的DTX-GA-BSA NPs混懸劑平均粒徑135.8 nm,PDI=0.09,Zeta電位-21.4 mV,外觀為均勻透明的淡黃色溶液。由此可知,DTX-GA-BSA NPs混懸劑的平均粒徑較小,分布窄且均勻。本課題選取人胃癌低分化細(xì)胞MGC-803和人胃癌中分化細(xì)胞HGC-27細(xì)胞系為模型細(xì)胞,采用藥物相互作用指數(shù)(CDI)分析DTX和GA聯(lián)合應(yīng)用的協(xié)同作用,經(jīng)過(guò)篩選得到DTX和GA的最佳協(xié)同作用比例。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明DTX和GA對(duì)人胃癌細(xì)胞的增殖抑制具有協(xié)同作用,且PTX:TMZ=1:23(w/w)時(shí),對(duì)MGC-803細(xì)胞的協(xié)同抑制作用最強(qiáng);而PTX:TMZ=1:195(w/w)時(shí),對(duì)HGC-27細(xì)胞的協(xié)同抑制作用最強(qiáng)。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)制備的DTX-GA-BSA NPs粒徑較小、穩(wěn)定性好,且能延緩藥物釋放;優(yōu)選的DTX-GA-BSA NPs處方工藝穩(wěn)定可靠,建立的數(shù)學(xué)模型具有良好預(yù)測(cè)能力和實(shí)用性。這些為DTX和GA新型給藥系統(tǒng)研究提供了一種新的有效策略。此外,在此基礎(chǔ)上,又通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明DTX和GA對(duì)MGC-803細(xì)胞,HGC-27細(xì)胞具有協(xié)同增殖抑制作用,采用CDI分析DTX和GA聯(lián)合應(yīng)用的協(xié)同性,經(jīng)過(guò)篩選得到DTX與GA的最佳協(xié)同作用比例。后續(xù)將繼續(xù)研究DTX-GA-BSA NPs的體外協(xié)同抗胃癌的行為,選擇DTX和GA以最佳協(xié)同比例共載入納米粒,進(jìn)一步評(píng)價(jià)DTX-GA-BSA NPs中DTX和GA的體外協(xié)同抗人胃癌細(xì)胞的作用,探討B(tài)SA所攜帶的藥物是否能更好地發(fā)揮療效。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R943
【圖文】：

MW=807.9g/mol，分子式為 C43H53NO14，結(jié)構(gòu)式如圖0-1。從歐洲紅豆杉（Taxus baccata L.）獲得的半合成植物生物堿（紫杉醇的基礎(chǔ)上改構(gòu)），是一種新型的紫杉烷類(lèi)抗腫瘤藥。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)的適應(yīng)癥包括：胃癌，肺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌和頭頸癌。許多研究表明，DTX 的活性至少高于紫杉醇 5 倍。DTX 為白色或近白色粉狀物，熔點(diǎn)232，密度為 1.37gcm-1，閃點(diǎn) 498.4，沸點(diǎn) 900.5，本品幾乎溶?

圖 0-2 藤黃酸結(jié)構(gòu)式黃酸的作用機(jī)制酸作用機(jī)制包括：誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞增殖，增強(qiáng)活性氧導(dǎo)自噬，抑制端粒酶活性和核因子 κ 輕鏈增強(qiáng)子活性 B 細(xì)胞截轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[34-40]。大量研究顯示藤黃酸具有抗胃癌的潛力。趙等黃酸可以通過(guò)增加 Bax 的表達(dá)和抑制 bc1-2 的表達(dá)，可以誘導(dǎo)，而不影響正常細(xì)胞。藤黃酸還能通過(guò)下調(diào) C-myc 來(lái)降低人HTERT）的轉(zhuǎn)錄活性和抑制 BGC-823 細(xì)胞中 Akt 的磷酸化來(lái)修飾，從而抑制 BGC-823、MGC-803 和 SGC-7901 人胃癌細(xì)黃酸處理過(guò)的 BGC-823 細(xì)胞出現(xiàn)抑制增殖時(shí)，導(dǎo)致 CDK7 激

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