【摘要】：雙歧桿菌(Bifidobacterium)是1899年由法國學者Tissier從母乳喂養(yǎng)的嬰兒糞便中分離出的一種厭氧的革蘭氏陽性桿菌。它是人體內(nèi)具有益生功效的優(yōu)勢菌群,在維持和提高免疫力、促進人體發(fā)育、延緩機體衰老、以及抗腫瘤等方面有非常重要的作用,雙歧桿菌已成為人體健康的重要指標之一。硒是人體必需的微量元素,具有干預各種癌癥的作用。無機硒、有機硒及元素硒是硒的幾種主要存在形式,有機硒,元素硒及無機硒三者的生物利用度依次下降,而毒性依次提高。微生物轉(zhuǎn)化硒產(chǎn)品除低毒性和生物利用度高的特點之外,還具有一系列對于人類有益的功效,因此開發(fā)富硒長雙歧桿菌具有巨大的前景。本文通過富硒長雙歧桿菌高通量篩選培養(yǎng),利用長雙歧桿菌生理代謝特點將培養(yǎng)液中無機硒轉(zhuǎn)化為有機硒,從而獲得更高生物利用度的富硒長雙歧桿菌,通過對7L罐發(fā)酵條件以及凍干條件的進一步優(yōu)化,得到硒蛋白含量高的富硒長雙歧桿菌。首先,通過采用96孔深孔板微型化培養(yǎng)和酶標儀檢測,建立一種快速、高效的富硒長雙歧桿菌高通量篩選技術(shù),采用初篩與復篩、富硒馴化初篩與復篩及搖瓶驗證相結(jié)合的方式,篩選到一株富硒長雙歧桿菌菌株XBL-20。與原始菌株相比,其搖瓶發(fā)酵活菌數(shù)提高了3倍,罐發(fā)酵活菌數(shù)約提高了4.4倍,且多次傳代均能維持在較高活菌水平。其次,通過對發(fā)酵種子、發(fā)酵培養(yǎng)基成分、7L罐培養(yǎng)條件、凍干條件以及亞硒酸鈉添加條件的優(yōu)化,最終得到硒蛋白含量高的富硒長雙歧桿菌。經(jīng)過條件摸索后已經(jīng)連續(xù)發(fā)酵3個批次,獲得硒蛋白含量高達85%以上富硒長雙歧桿菌。
【學位授予單位】：上海師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：Q93;TQ920.6
【圖文】：

海師范大學碩士學位論文 第 2 章 富硒長雙歧桿菌優(yōu)勢菌株的高通量板中，每個孔做 4 個平行。厭氧培養(yǎng) 18 小時后，每孔取 200μl 到 96 酶標板行 OD600檢測， OD 值最大的 5 個孔接斜面進行甘油管保藏。因 OD 值反應包括活菌、死菌總共的吸光值，所以待斜面長成后，測定每個菌株的活菌菌數(shù)最高的菌株即為優(yōu)勢菌株，用于富硒長雙岐的馴育。活菌數(shù)最高的菌株時進行甘油管保藏，3 個月要重新復蘇按此流程篩選一次，以保證活菌數(shù)9CFU/ml 以上。

2 章 富硒長雙歧桿菌優(yōu)勢菌株的高通量篩選 上海師范大學碩士學位挑取點大且不紅的單菌落于裝有 1ml 培養(yǎng)基的 96 深孔板中，挑取 960 個單（10 塊深孔板，96*10=960）于 5.0μg/ml 亞硒酸鈉培養(yǎng)基的 96 深孔板中進選。厭氧培養(yǎng) 18 小時后，每孔取 200μl 到 96 酶標板中進行 OD600檢測，最大的 3 個孔稀釋 105，106涂布到 7.5μg/ml 亞硒酸鈉平皿上，同時接斜面。如此反復循環(huán)，直到 20.0μg/ml 亞硒酸鈉壓力或者直到出現(xiàn)大部分紅色菌止。每一個亞硒酸鈉濃度壓力馴化下得到的菌株都要接斜面后甘油管保存，要重新復蘇按此流程篩選一次，以保證菌株的富硒能力不退化。富硒能力體：菌株發(fā)酵不變紅，硒蛋白達到 85%以上。

【參考文獻】

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本文編號：2738597