【摘要】：核糖核酸不僅在基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)和蛋白質(zhì)的生物合成起著至關(guān)重要的作用,而且還參與著細(xì)胞的許多生理功能。核糖核酸廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、醫(yī)藥保健以及畜牧養(yǎng)殖業(yè)上。酵母細(xì)胞中RNA含量普遍都高于其他微生物,且酵母細(xì)胞中RNA含量比DNA含量高得多,容易提取得到品質(zhì)非常優(yōu)良的RNA,且酵母生長(zhǎng)繁殖快可以大規(guī)模培養(yǎng),對(duì)培養(yǎng)基的要求極低。ARTP誘變育種技術(shù)目前已經(jīng)成功地對(duì)包括細(xì)菌、放線菌、真菌、酵母、微藻等在內(nèi)的近60種微生物進(jìn)行了誘變處理。ARTP誘變育種儀突變性能優(yōu)越,可引發(fā)種類豐富的DNA損傷,最終獲得大容量突變庫(kù)。通過(guò)ATRP誘變技術(shù)進(jìn)行高核酸釀酒酵母選育,快速獲得細(xì)胞生物量以及RNA含量大幅度提高且性能優(yōu)良及遺傳穩(wěn)定的正突變株,以期解決我國(guó)現(xiàn)存的高核酸酵母細(xì)胞生物量和RNA產(chǎn)量不太高兩大關(guān)鍵問(wèn)題,降低高核酸酵母產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)成本,提高經(jīng)濟(jì)效益,為食品工業(yè)、醫(yī)藥保健和養(yǎng)殖畜牧業(yè)的發(fā)展提供基礎(chǔ)。本研究以從環(huán)境中篩選得到的釀酒酵母Y17作為出發(fā)菌株,分離得到RNA含量較高的單倍體菌株并對(duì)其進(jìn)行連續(xù)3次ARTP誘變,利用氯化鉀敏感篩選得到RNA含量大幅度提高的誘變菌株Y17aM3-12,然后對(duì)Y17aM3-12進(jìn)行26S rDNA鑒定、生理生化特性以及傳代穩(wěn)定性分析,最后進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)優(yōu)化。研究結(jié)果如下:Y17于麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基中誘導(dǎo)產(chǎn)孢第7天時(shí)產(chǎn)孢率為32%,分離得到4株Y17 a型單倍體,3株Y17α型單倍體并測(cè)定RNA含量,得到RNA含量最高為90 mg-RNA/g-DCW的a型單倍體并作為出發(fā)菌株進(jìn)行ARTP誘變育種。經(jīng)過(guò)連續(xù)3次ARTP誘變,最終得到一株RNA含量為112 mg-RNA/g-DCW,比原始出發(fā)菌株Y17高39%的誘變菌株Y17aM3-12。對(duì)Y17aM3-12進(jìn)行了26S rDNA鑒定,將測(cè)得的基因序列與Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)的序列進(jìn)行同源性比較,結(jié)果表明26S rDNA序列與Saccharomyces cerevisiae NL9-9同源性達(dá)100%。Y17aM3-12的形態(tài)特征、糖類發(fā)酵、碳源同化以及氮源同化能力均與原始出發(fā)菌株Y17相似且與菌種鑒定手冊(cè)中釀酒酵母的結(jié)果一致。Y17aM3-12葡萄糖耐受濃度為10%,KCl耐受濃度為160 g/L,在酸性條件pH5.5時(shí)生長(zhǎng)最好。通過(guò)單因素試驗(yàn)確定了最佳接種量為10%,最佳pH為5.5,最佳溫度為26℃;最佳碳源為糖蜜,最佳氮源為蛋白胨,最佳磷源為磷酸。通過(guò)正交試驗(yàn)最終綜合確定了最佳培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件組合為接種量5%、培養(yǎng)溫度30℃、培養(yǎng)基初始pH5.0、糖蜜10%、蛋白胨2%、磷酸1.0 mL/L。通過(guò)對(duì)Y17aM3-12進(jìn)行培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件優(yōu)化,最終Y17aM3-12生長(zhǎng)OD_(600)由14提高至23,提高了64%;RNA含量由112 mg-RNA/g-DCW提高至142 mg-RNA/g-DCW,提高了26%。
【圖文】：

圖 1-1ARTP 溫度與輸入功率的關(guān)系he relationship between the temperature and the input pow介質(zhì)覆蓋，如圖 1-2 所示，，正弦形式的波形偏差很小有助于高效選育優(yōu)良突變株；

圖 1-1ARTP 溫度與輸入功率的關(guān)系he relationship between the temperature and the input pow介質(zhì)覆蓋，如圖 1-2 所示，正弦形式的波形偏差很小有助于高效選育優(yōu)良突變株；
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：TQ926

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2668981