發(fā)布時間：2020-04-27 09:36

【摘要】：脂肪組織脂質(zhì)代謝,包括脂肪組織的脂肪沉積和棕脂化等脂質(zhì)代謝及相關(guān)炎性,在肥胖及相關(guān)代謝疾病中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。食物源黃酮類化合物具有抗炎、抗肥胖、改善能量代謝等生物活性。木犀草素(LU)、芹菜素(AP)、白楊素(CH)和槲皮素(QU)、楊梅素(MY)、山奈酚(KA)分別是最常見于食物中的黃酮類和黃酮醇類化合物,且都具有5,7-二羥基黃酮這一共同結(jié)構(gòu)。目前,對于這六種黃酮在調(diào)控炎性和脂質(zhì)代謝方面的活性差異及可能的構(gòu)效關(guān)系尚不明確。因此,本研究基于巨噬細(xì)胞炎性極化、脂肪細(xì)胞脂肪分化和棕脂分化這三個體外模型,分別考察了上述六種5,7-二羥基黃酮的活性作用差異,并結(jié)合其結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行構(gòu)效分析�；贚PS刺激的RAW264.7巨噬細(xì)胞和小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞,建立M1極化模型,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示三種黃酮類(無3-OH)抑制M1巨噬細(xì)胞標(biāo)記蛋白CD274及CD38表達(dá)的活性均強于三種黃酮醇類(有3-OH),定量PCR和Western blot結(jié)果顯示三種黃酮類抑制炎性因子表達(dá)及炎性信號蛋白活化的作用強弱為:LU(3’,4’-OH)AP(4’-OH)CH,三種黃酮醇類當(dāng)中,QU(3’,4’-OH)的抑制活性最強,表明C環(huán)3位的羥基取代不利于5,7-二羥基黃酮抑制巨噬細(xì)胞M1極化的活性,而B環(huán)上3’,4’位羥基取代有利于增強其活性。利用脂肪化誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞和小鼠皮下前脂肪細(xì)胞分化,建立脂肪細(xì)胞分化模型,通過油紅染色定量考察六種黃酮抗脂肪沉積的活性強弱,定量PCR檢測六種黃酮對脂肪化相關(guān)基因表達(dá)的影響,結(jié)果顯示六種黃酮抗脂肪沉積的活性排序為:LUQU/MYAP/KACH,表明B環(huán)上3’,4’位羥基取代能夠促進(jìn)5,7-二羥基黃酮降低脂肪沉積的活性,而C環(huán)3位的羥基取代并不利于其降脂活性。分離小鼠皮下脂肪組織中的前脂肪細(xì)胞,利用棕脂分化試劑誘導(dǎo)棕脂化,建立脂肪細(xì)胞棕脂分化模型,通過定量PCR考察六種黃酮對產(chǎn)熱基因及淺棕脂細(xì)胞標(biāo)記基因表達(dá)的影響,并進(jìn)一步對相關(guān)信號蛋白進(jìn)行Western blot檢測,結(jié)果顯示LU(有3’,4’-OH,無3-OH)具有顯著促進(jìn)脂肪細(xì)胞棕脂化的作用,表明B環(huán)3’,4’位羥基取代有利于棕脂化活性�？傊�,本文分別對六種5,7-二羥基黃酮抑制巨噬細(xì)胞炎性極化、抑制脂肪細(xì)胞脂肪沉積和促進(jìn)脂肪細(xì)胞棕脂化的活性與結(jié)構(gòu)特征的關(guān)系進(jìn)行了總結(jié)與探討,以期為食物源黃酮類化合物的進(jìn)一步利用與開發(fā)提供思路。
【圖文】：

圖 1.1 小鼠和人類中棕脂、白脂及淺棕脂細(xì)胞的分布Fig 1.1 Anatomical sites of brown, white and beige adipocytes in mice and humans.（引自 BarteltA, Heeren J. Nature Reviews Endocrinology, 2013, 10(1):24-36.）1.2.2 肥胖發(fā)生過程中白色脂肪組織脂質(zhì)代謝變化與胰島素抵抗在生理狀態(tài)下，WAT 處于脂肪合成與脂解、促炎性與抗炎性的動態(tài)平衡中。當(dāng)機體攝入過量營養(yǎng)時，胰島素的合成代謝作用調(diào)控了白色脂肪細(xì)胞的能量代謝介導(dǎo)了糖脂攝入和脂質(zhì)積累并抑制了脂解過程，從而打破了脂解與脂肪合成的平衡，導(dǎo)致白脂細(xì)胞的增大。此時，肥大的脂肪細(xì)胞會分泌 MCP1 和 LTB4 等趨化因子[32]，單核細(xì)胞響應(yīng)趨化信號后，遷移到脂肪組織中，分化為脂肪組織駐留巨噬細(xì)胞（adiposetissuemacrophages，ATMs），并極化為高度促炎的 M1 型巨噬細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，在肥胖狀態(tài)下，募集到脂肪組織的外周血單核細(xì)胞中有超過 90%都極化為促炎性的 ATMs[33,34]。ATMs 本身也會分泌趨化因子，吸引了更多以巨噬細(xì)胞為代表的炎性免疫細(xì)胞浸潤到 WAT 中。除了數(shù)量的變化，巨噬細(xì)胞的表型在肥胖形成過程中的改變也非常顯著。顯然，ATMs 存在于脂質(zhì)豐富的環(huán)境中，而 FFAs 可

圖 1.2 肥胖、炎性和胰島素抵抗Fig 1.2 Obesity, tissue inflammation and insulin resistance（引自 Schenk S, Saberi M. The Journal of clinical investigation, 2008, 118(9): 2992-3002.）胰島素是機體內(nèi)唯一具有降低血糖作用的激素分子。胰島素首先與胰島素受體結(jié)合，導(dǎo)致胰島素受體底物（insulinreceptor substrates，IRS）的酪氨酸磷酸化，進(jìn)一步激活 Akt，進(jìn)而激活胰島素信號通路，這對于維持體內(nèi)的葡萄糖穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。然而，肥胖狀態(tài)下，脂肪組織流出的 FFAs 以及分泌的促炎性細(xì)胞因子等都會損害胰島素信號通路。例如，TNF 可以刺激包括 IKK、JNK 在內(nèi)的絲氨酸激酶，從而導(dǎo)致 IRS-1 的絲氨酸磷酸化，，抑制胰島素信號通路[37, 38]。IL-6 通過作用于下游靶分子 SOCS3，可以阻斷胰島素受體與 IRS-1 的相互作用[39]。FFAs 可作為配體激活 TLR2/TLR4 信號通路，引起 TAK1 和 TAB1 相互作用，然后激活 IKK 和 JNK從而導(dǎo)致 IRS-1 的絲氨酸磷酸化[35]。脂肪酸代謝的中間產(chǎn)物，神經(jīng)酰胺，可通過去磷酸化 Akt 抑制胰島素信號[40]。另一方面，脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，如 adiponectin可促進(jìn)胰島素敏感性[41,42]。綜上所述，在肥胖的形成過程，WAT 的脂肪積累增加，
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TQ28;TQ460.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙靜;李玉琴;王芳喬;賈寶秀;劉彩紅;王仁亮;;6種黃酮類化合物清除超氧陰離子自由基能力及其構(gòu)效關(guān)系[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2014年29期

本文編號：2642123