發(fā)布時(shí)間：2020-04-05 16:13

【摘要】：為了探究生物質(zhì)熱解液及微生物發(fā)酵產(chǎn)物在綠色農(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工中的應(yīng)用,減少化學(xué)農(nóng)藥殘留,本文通過生長速率法分別測(cè)定了生物質(zhì)熱解液和芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)白菜菌核菌的抑菌率,并進(jìn)行了復(fù)合處理試驗(yàn),通過HPLC和LC-MS-MS對(duì)芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)物的抑菌物質(zhì)進(jìn)行了探究,并進(jìn)行了生物質(zhì)熱解液和類芽孢桿菌SP-17的活體抑菌試驗(yàn)。抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明生物質(zhì)熱解液對(duì)白菜菌核菌具有良好的抑制效果,EC50值為0.76%,最小抑菌濃度為1.82%,最小殺菌濃度為2.22%�？莶菅挎邨U菌SP-7、甲基型芽孢桿菌SP-8、類芽孢桿菌SP-17、地衣形芽孢桿菌(15833)標(biāo)3發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)白菜菌核菌也具有一定的抑制作用,抑菌率分別為60.47%、59.30%、60.89%、67.57%。復(fù)合處理試驗(yàn)結(jié)果表明生物質(zhì)熱解液與SP-7、SP-8、SP-17、標(biāo)3發(fā)酵產(chǎn)物分別復(fù)合使用時(shí)對(duì)白菜菌核菌的抑制均具有一定的增效作用。生物質(zhì)熱解液和SP-7發(fā)酵產(chǎn)物最佳復(fù)合比例為3:1或2:1,抑菌率分別為59.35%、57.64%,兩者并無顯著性差異(p0.05),與生物質(zhì)熱解液和SP-7發(fā)酵產(chǎn)物單獨(dú)處理相比,3:1復(fù)合處理組的抑菌率分別高出14.79個(gè)百分點(diǎn)和23.76個(gè)百分點(diǎn),2:1復(fù)合處理組的抑菌率分別高出13.08個(gè)百分點(diǎn)和22.05個(gè)百分點(diǎn)。生物質(zhì)熱解液和SP-8、SP-17、標(biāo)3發(fā)酵產(chǎn)物最佳復(fù)合比例分別為1:2、1:1、3:1,抑菌率分別為60.68%、91.75%、64.63%,與生物質(zhì)熱解液和發(fā)酵產(chǎn)物單獨(dú)處理時(shí)的抑菌率相比,分別高出9.17和35.10個(gè)百分點(diǎn)、49.22和62.81個(gè)百分點(diǎn)、26.78和40.41個(gè)百分點(diǎn)。HPLC和LC-MS-MS對(duì)芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)物中抑菌物質(zhì)分離鑒定結(jié)果表明,SP-7和SP-8發(fā)酵產(chǎn)物中可能含有C15IturinB同分異構(gòu)體或構(gòu)象異構(gòu)體,分子量在1097.1～1097.4之間。SP-17發(fā)酵產(chǎn)物中含有3種Surfactin同系物,同時(shí)可能含有C15IturinB。其中A物質(zhì)存在分子量為1008.5、1097.3的質(zhì)譜峰,可能為C13SurfactinA 或 C14SurfactinB 和 C15IturinB。B 物質(zhì)存在分子量為 1022.5、1097.0的質(zhì)譜峰,C物質(zhì)分子量為1022.7,B、C物質(zhì)可能為C14SurfactinA或C15SurfactinB或C14SurfactinC,但B物質(zhì)也可能為C15IturinB。D物質(zhì)分子量為1036.8,可能為 C15SurfactinC。活體抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明生物質(zhì)熱解液和SP-17復(fù)合使用對(duì)白菜菌核菌具有一定的防治效果,優(yōu)于生物質(zhì)熱解液單獨(dú)處理組和對(duì)照組,處理5 d后,復(fù)合處理組病情指數(shù)為49.79%,防治效果為32.78%。
【圖文】：

６７．５７逡逑ＬＪＬＪＬＪ逡逑圖３．４芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)白菜菌核菌抑菌率的測(cè)定逡逑Ｆｉｇ．３．４邋Ｔｈｅ邋ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ｂａｃｉｌｌｕｓ邋ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ａｇａｉｎｓｔ邋Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ邋ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ逡逑１５逡逑

圖３．１３為Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ標(biāo)準(zhǔn)品的ＨＰＬＣ色譜圖，從圖可以看出標(biāo)準(zhǔn)品有多個(gè)色逡逑譜峰，主要的峰有５個(gè)，說明即使是標(biāo)準(zhǔn)品也不是單一的物質(zhì)，而是由許多逡逑Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ同系物組成，主要色譜峰保留時(shí)間在４？１０邋ｍｉｎ之間。圖３．１４－３．１６分別逡逑為８？－７、３卩－８、５？－１７的冊(cè)１＾色譜圖，在４？１0１１１丨１１內(nèi)，３個(gè)樣品均有色譜峰逡逑出現(xiàn)。具體保留時(shí)間和峰面積如表３．６所示，從表中可以看出３個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品逡逑保留時(shí)間基本一致，個(gè)別峰保留時(shí)間不完全一致，但相差不超過３０邋ｓ。因此推測(cè)逡逑３個(gè)樣品粗提物中可能含有表面活性素物質(zhì)，需要進(jìn)一步采用液相質(zhì)譜進(jìn)行分逡逑析。收集粗提物洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、冷凍干燥后用于質(zhì)譜分析。逡逑１邋00■邐ｊＳ逡逑：！邐１邋ｇ邐逡逑４．０邐５．０邐６．０邐７．０邐６０邐９０邐１０．０邐１１０邐１２．０邐１３．０邐１４．０邐ｍｎ逡逑圖３．１３邋Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ標(biāo)準(zhǔn)品ＨＰＬＣ色譜圖逡逑Ｆｉｇ．３．１３邋ＨＰＬＣ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ逡逑ｎｊＶＷＩＯ）＾逡逑＜ＢｎｒａＴＡ３ＴＯ５ｎ逡逑ｉ邋ｉｌ邋ｉ邋Ｉ逡逑４．０邐５．０邐６０邐７．０邐８．０邐９０邐１００邐１１．０邐１２０邐１３．０邐１４０邐ｍｒ逡逑圖３．１４樣品ＳＰ－７邋ＨＰＬＣ色譜圖逡逑Ｆｉｇ．３．１４邋ＨＰＬＣ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：TK6;TQ920.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2615230