植物病害問題是影響農作物產量和品質的一大難題。番茄作為世界上栽培最為普遍的果蔬之一,受病害影響也相當嚴重。傳統防治措施如改善栽培措施對防治病害的能力是有限的。而化學防治帶來環(huán)境污染問題,藥物殘留對人類健康也造成了潛在威脅。因此,通過轉基因手段獲得抗病能力強的番茄新品種,可以克服傳統育種周期長,物種隔離等問題,為番茄選育及種質資源的優(yōu)化開辟了新道路。NP24作為病程相關蛋白PR5家族中的一員,其生物學功能、植物抗病性分子機制、抗病防衛(wèi)基因調控的研究較多,尤其是它們與植物抗病性的關系引起了強烈關注。因此對該基因的克隆和功能驗證將對番茄選育具有重要價值。本研究中以野生型番茄為材料,克隆了NP24基因,分析了它的組織表達模式,并利用生物學軟件分析及預測了它的生物學功能及進化關系。同時,構建了該基因的超表達載體和干擾載體,通過遺傳轉化分別獲得了超表達和干擾的轉基因株系。同時,首次體外真核表達純化出有活性的NP24蛋白,進行了抑菌實驗,驗證了該蛋白對植物病原菌的抗性關系。本研究主要獲得以下成果:(1)成功克隆NP24。NP24含有718個核苷酸的開放閱讀框,編碼247個氨基酸,屬于PR5蛋白家族的類...

【文章頁數】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1NP24全長片段的PCR擴增847bpFig2.1PCRAmplificationofNP24geneM：Trans2KMarker

植株的鑒定均參考2.2RNA并反轉錄合成cD達量變化。分析長同樣大小的T2超表境為：光照16h，黑暗晚溫度設置在18±2℃。與野生型植株出現失水物信息學分析片段全長847bp，包含

圖2.2NP24蛋白信號肽剪切位點預測結果

碩士學位論文2NP24的克隆通過ORFFinder在線軟件對NP24基因全長序列的開放閱讀框有741個核苷酸并編碼由247個氨基酸殘基構成的蛋白。NP24蛋白理化性質ProtParam預測軟件顯示NP24是26kD分子量的蛋白，等電點，含有較....

圖2.3蛋白跨膜結構預測

圖2.3蛋白跨膜結構預測Fig.2.3PredictionoftransmembranestructureofNP24P24進化樹分析過NP24的蛋白序列進行比對找到與其同源的基因，通過ClustalXMEGA5.1NJ法建立系統進化樹顯示該基因與....

圖2.4NP24系統進化樹分析結果

圖2.3蛋白跨膜結構預測Fig.2.3PredictionoftransmembranestructureofNP242.3.2NP24進化樹分析通過NP24的蛋白序列進行比對找到與其同源的基因，通過ClustalX比對序列，用MEGA5.1NJ....

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