雖然通過傳統(tǒng)的雜交育種和選育的方法培育出了在北方地區(qū)生長速度快、抗寒力強的荷包紅鯉、高寒鯉抗寒品系等優(yōu)良品種，但鯪魚(Cirrhinusmolitorella)、羅非魚等還不能依靠傳統(tǒng)的育種方法獲得抗寒品系。這就要求從基因表達水平研究魚類的耐低溫機制，本實驗主要是研究東北地區(qū)的具有耐低溫性狀的黑龍江鯉(Cyprinus carpio)的MIPS基因在斑馬魚和羅非魚中的表達情況。 構(gòu)建的外源表達載體在斑馬魚中的熒光觀察結(jié)果顯示，兩個重組表達載體均不影響EGFP的表達，只是表達強度存在一定差異，未插入外源目的基因的重組表達載體中EGFP基因的表達強度明顯高于插入外源目的基因的重組表達載體EGFP基因的表達。重組表達載體的成功構(gòu)建顯示金魚Tgf2轉(zhuǎn)座子和普通表達載體可以介導外源基因在斑馬魚中的表達。 對轉(zhuǎn)基因斑馬魚F1、F2代和轉(zhuǎn)基因羅非魚F1代進行PCR檢測，結(jié)果顯示靶基因MIPS的編碼區(qū)能夠完整的整合到斑馬魚和羅非魚基因組中，檢測注射pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的轉(zhuǎn)基因斑馬魚F1代整合效率達31.4%；檢測注射普通表達載體的轉(zhuǎn)基因斑馬魚F1代整合效率達30.4%；檢測注射...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1MCS序列

都是國產(chǎn)分析純產(chǎn)品。引物合成及測序由北京英俊生物技術(shù)公司完成。驗儀器pendorf梯度PCR儀（Mastercyclergradient），紫外照相儀。驗方法CS序列設(shè)計與合成用Primerpremier5.0軟件設(shè)計多克隆位點序列，從酶切位點表中選擇表達載靶基因....

圖2.2pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的構(gòu)建過程

圖2.2pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的構(gòu)建過程Fig.2.2theestablishmentprocessofpTgf2-EF1α-MCS-EGFP.4表達載體pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的PCR和酶切驗證表達載體pTgf2-EF1....

圖2.3MCS序列的PCR擴增Fig.2.3thePCRamplificationofMCSsequence

與分析S序列的PCR擴增與克隆驗設(shè)計的MCS長度為121bp，經(jīng)PCR擴增成功獲得雙鏈的MCS序列，如圖1bp處箭頭所指的條帶即為擴增出的MCS序列，擴增片段大小符合所設(shè)計其克隆至PMD18-T質(zhì)粒中，菌落PCR結(jié)果如圖2.3b圖，在121bp....

圖2.4表達載體pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的PCR擴增與酶切Fig.2.4thePCRamplificationandenzymedigestionofexpressionvectorpTgf2-EF1α-MCS-EGFP

18圖2.4表達載體pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的PCR擴增與酶切Fig.2.4thePCRamplificationandenzymedigestionofexpressionvectorpTgf2-EF1α-MCS-EGFP圖2.5質(zhì)粒....

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