Fibulin家族蛋白屬于分泌型糖蛋白,主要與包括基底膜和彈性微細(xì)纖維在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)的各種結(jié)構(gòu)組件相互作用,參與細(xì)胞外基質(zhì)的構(gòu)成并維持其穩(wěn)定。Fibulin蛋白可以調(diào)節(jié)各種細(xì)胞過程如細(xì)胞生長、分化,血管生成及腫瘤生長,然而,它們在骨骼發(fā)育和疾病方面的作用仍不清楚。草魚(Ctenopharyngodon idella)為我國主要淡水養(yǎng)殖品種,占全國魚類養(yǎng)殖產(chǎn)量首位,至今仍在長江中下游暴發(fā)流行,波及全國,年死亡損失超過30%,嚴(yán)重危害草魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。研究草魚呼腸孤病毒蛋白與宿主蛋白的相互作用有助于闡明病毒蛋白的生物學(xué)功能及病毒致病機(jī)理。利用前期本實驗室的酵母雙雜交篩選與GCRV-JX01的VP7和GCRV-JX02W的VP56相互作用的蛋白,共同篩選出了一個細(xì)胞外基質(zhì)蛋白Fibulin-4,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)Fibulin-4在草魚的肌肉、腦、腸道中表達(dá)水平較高,這與臨床中草魚出血病的紅肌肉、紅鰓蓋和紅腸癥狀相吻合。我們嘗試運用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)方法進(jìn)一步驗證Fibulin-4與兩種GCRV外衣殼蛋白之間的相互作用。本課題主要從以下三點進(jìn)行研究:1桿狀病毒表達(dá)II型呼腸孤病毒外突VP56蛋...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖７ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析純化的ＧＳＴ與ＧＳＴ－Ｆｉｂｕｌｉｎ－４蛋白

ｉｏｎＫｉｔ試劑盒，裂解細(xì)胞表達(dá)的ＧＦＰ蛋白與ＧＦＰ－Ｆｉｂｕｌｉｎ－４蛋白與結(jié)合Ｈｉｓ－ＶＰ７，Ｈｉｓ－ＶＰ５６的Ｈｉｓ－ＰｕｒＣｏｂａｌｔＲｅｓｉｎ，通過均能夠在Ｅｌｕｔｉｏｎ中檢測到ＧＦＰ－Ｆｉｂｕｌｉｎ－４蛋白質(zhì)，而檢測不到對照蛋白質(zhì)ＧＦＰ（圖９），進(jìn)一步證實了ＶＰ７，Ｖ....

圖1-1S7基因PCR擴(kuò)增電泳圖

圖1-1S7基因PCR擴(kuò)增電泳ctrophoreticprofileofPCRprod為約4000bp特異性條帶(圖圖1-2桿粒DNA擴(kuò)增電泳圖

圖1-2桿粒DNA擴(kuò)增電泳圖

14圖1-2桿粒DNA擴(kuò)增電泳圖phoreticprofileofPCRproduct表達(dá)及純化毒表達(dá)系統(tǒng)用戶手冊于六育細(xì)胞72h，每天觀察細(xì)細(xì)胞生長停滯，呈囊泡狀pm離心5min，采用0.22μmffer30μL，100℃煮沸5mi清反復(fù)凍融后制樣，Wes....

圖2-1HisPull-Down試驗流程圖

將桿狀病毒表達(dá)的His-VP7與His-VP56蛋白去結(jié)合His珠子，與在GCO細(xì)胞中真核表達(dá)的GFP-Fibulin-4蛋白孵育，GFP-N1蛋白作為空白對照。一：誘餌蛋白的裂解（1）從-80℃拿出已表達(dá)的蛋白（表達(dá)的VP7和VP56蛋白）（15mL離心管中）（2）每5....

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