草魚(yú)(Ctenopharyngodon idella)是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的主要養(yǎng)殖魚(yú)類之一。2011年產(chǎn)量達(dá)到420萬(wàn)噸(FAO,2012)。隨著草魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,各種病癥的頻發(fā),特別是與脂代謝相關(guān)的疾病(脂肪肝綜合癥),嚴(yán)重制約其產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。本論文以具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的草魚(yú)為研究對(duì)象,以與脂代謝關(guān)鍵酶(葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)和肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I(CPT I))為研究重點(diǎn),借助蛋白水平(酶學(xué)動(dòng)力學(xué)特性)和分子水平(克隆、結(jié)構(gòu)分析和組織表達(dá))的手段,擬對(duì)草魚(yú)不同組織和不同發(fā)育期的關(guān)鍵酶進(jìn)行研究,同時(shí)從脂代謝相關(guān)酶的酶活性及其基因表達(dá)水平研討了礦物元素銅和鋅與脂代謝的關(guān)系。1草魚(yú)G6PD的分離純化及其動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的研究本研究從草魚(yú)肝胰臟中通過(guò)2’,5’-ADP-瓊脂糖4B親和層析和DEAE瓊脂糖離子交換層析分離純化G6PD,并研究了該酶學(xué)的分子量、最適溫度、最適p H和堿性條件下的穩(wěn)定性、動(dòng)力學(xué)參數(shù)以及金屬離子對(duì)酶活性的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),純化后G6PD最終酶活性為18U/mg蛋白,純化倍數(shù)為1066,最終純化回收率為19.5%,亞分子量為71.85k Da。G6PD的最適溫度為42...

【文章頁(yè)數(shù)】：139 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1G6PD在細(xì)胞代謝中的作用Fig.1.1RoleofG6PDincellularmetabolism(Salati和Amir-Ahmady2001)

戊糖磷酸途徑（Pentosephosphatepathway,PPP）又稱戊糖支路（pentoseshun酸葡萄糖酸途徑（phosphogluconatepathway）及戊糖磷酸循環(huán)（pentosephosphycle），是動(dòng)物體內(nèi)糖代謝過(guò)程中的重要途徑，其主要生理....

圖1.2可逆抑制作用動(dòng)力學(xué)曲線（A：競(jìng)爭(zhēng)性抑制曲線；B：非競(jìng)爭(zhēng)性抑制曲線；C：反競(jìng)爭(zhēng)性抑制曲線）（王鏡巖等，2002）

草魚(yú)脂代謝相關(guān)酶的分離純化、分子克隆、酶動(dòng)力學(xué)性質(zhì)及對(duì)銅和鋅的響應(yīng)研究015）應(yīng)用毛細(xì)管微反應(yīng)酶的酶活測(cè)定方法研究G6PD，結(jié)果表明Cu2+，Pb2+，+競(jìng)爭(zhēng)性抑制G6PD，而KMnO4為反競(jìng)爭(zhēng)性抑制。同時(shí)，deSchroeder（2005）分Zn2+對(duì)來(lái)源于蟾蜍卵巢....

圖1.3魚(yú)體肝臟組織中能量代謝主要途徑

示了高脂飼料能抑制脂肪的生成，同時(shí)，表明高脂對(duì)肝存在組織特異性。Regost等（2001）研究表明投喂高脂生成酶活性沒(méi)有顯著性差異，可能與魚(yú)的種類有關(guān)。在胞實(shí)驗(yàn)下，發(fā)現(xiàn)EPA和DHA均抑制了脂肪的沉積（Alvar03），對(duì)黑鯛的研究中也得到了類似的結(jié)果（Om等，20。飼....

圖2.1(A)：G6PD的SDS-PAGE電泳圖（泳道1：組織勻漿液；2：SDS-PAGE標(biāo)準(zhǔn)蛋白；3和4為純化的G6PD）；(B)、(C)、(D)分別為pH、溫度和pH穩(wěn)定性對(duì)草魚(yú)肝胰臟G6PD活性的影響

本文編號(hào)：4005111