遲緩愛德華菌(Edwardsiella tarda)是危害水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的重要病原菌,該菌引起的疾病在世界海水、淡水養(yǎng)殖動物中普遍流行,帶來嚴重的經(jīng)濟損失。目前消毒劑、抗生素等仍是預(yù)防和治療愛德華菌病的主要方法,但存在細菌耐藥性、食品藥物殘留等問題。細菌菌蛻是通過調(diào)控噬菌體Phi X174的裂解基因E在革蘭氏陰性菌中的表達而形成的無細胞漿和繁殖能力的細菌空殼,沒有活菌的致病作用,同時菌蛻包含的LPS、類脂、肽聚糖等天然的免疫刺激復(fù)合物,具有天然的佐劑性質(zhì),能誘導(dǎo)更強的免疫反應(yīng),也符合環(huán)境無污染、水產(chǎn)食品無藥物殘留等優(yōu)點,因此菌蛻疫苗是比常規(guī)疫苗更理想的新型疫苗體系。為了研究遲緩愛德華菌菌蛻疫苗對羅非魚(Oreochromis niloticus)免疫保護效果,本試驗首先利用構(gòu)建的裂解質(zhì)粒載體通過高溫誘導(dǎo)制備了遲緩愛德華菌菌蛻疫苗,利用腹腔注射、口服兩種途徑免疫羅非魚,定期采集血清、頭腎、脾臟,分別檢測了血清抗體水平,血清中酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)和超氧化物歧化酶(SOD)三種酶活性和頭腎、脾臟中IL-1、IFN、TNF、Caspase3的相對表達量;并通過攻毒試驗計算了菌...

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【學(xué)位級別】：碩士

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1 前言
    1.1 遲緩愛德華菌研究進展
        1.1.1 遲緩愛德華菌病原學(xué)
        1.1.2 遲緩愛德華菌病流行病學(xué)
        1.1.3 遲緩愛德華菌病臨床癥狀病理組織學(xué)變化
        1.1.4 遲緩愛德華菌病的防控
    1.2 羅非魚養(yǎng)殖概況
    1.3 魚類免疫系統(tǒng)
        1.3.1 魚類的免疫器官
        1.3.2 魚類的免疫細胞
        1.3.3 魚類的免疫球蛋白
        1.3.4 魚類的細胞因子
    1.4 影響魚類免疫的主要因素
    1.5 魚類疫苗的接種途徑
    1.6 菌蛻疫苗研究現(xiàn)狀
        1.6.1 菌蛻疫苗
        1.6.2 菌蛻疫苗的優(yōu)點
        1.6.3 菌蛻作為抗原載體
    1.7 熒光定量技術(shù)
        1.7.1 熒光定量技術(shù)的分類
        1.7.2 實時熒光定量PCR的定量方法
        1.7.3 熒光定量技術(shù)的應(yīng)用
        1.7.4 熒光定量技術(shù)的優(yōu)點
    1.8 研究背景
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株，載體
        2.1.2 實驗試劑及耗材
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 實驗所用溶液及其配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 疫苗制備
        2.2.2 疫苗對羅非魚的免疫實驗
3 結(jié)果與分析
    3.1 PCR檢測結(jié)果
    3.2 溶菌動力學(xué)
    3.3 裂解效率
    3.4 攻毒劑量的確定
    3.5 ELISA最佳工作濃度
    3.6 抗體水平測定
    3.7 酶活力測定結(jié)果
    3.8 熒光定量測定結(jié)果
    3.9 相對免疫保護率結(jié)果
4 討論
    4.1 疫苗免疫對羅非魚抗體水平的影響
    4.2 疫苗免疫對羅非魚血清中酶活力的影響
    4.3 疫苗免疫對羅非魚免疫相關(guān)基因的影響
    4.4 疫苗免疫對羅非魚的免疫保護率
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
研究生期間發(fā)表論文



本文編號：3867971