異育銀鯽(Carassius gibelio)是我國重要的經(jīng)濟魚類,在淡水養(yǎng)殖中占有非常重要的地位。近年來,我國鯽魚養(yǎng)殖業(yè)中暴發(fā)一種病毒性疾病——鯽造血器官壞死癥,其病原為鯉皰疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2),給鯽魚養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟損失,嚴重影響了鯽魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。疫苗免疫被認為是預防水產(chǎn)養(yǎng)殖動物傳染性疾病最為有效的方法。本研究對CyHV-2細胞培養(yǎng)滅活疫苗的制備方法、有效免疫劑量、鯽魚免疫后的外周血免疫指標、血清生化指標變化規(guī)律與保護效果進行了研究,初步建立一種預防鯽造血器官壞死癥的免疫方法。本論文的主要內(nèi)容如下:1.采用β-丙內(nèi)酯(β-propiolactone,BPL)滅活細胞培養(yǎng)的鯉皰疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)制備滅活疫苗,分別以不同劑量的疫苗通過腹腔注射免疫健康異育銀鯽。在免疫后7、14、21、28d,從對照組和各免疫組中隨機挑選三尾鯽魚尾靜脈采血,取血清進行中和抗體滴度測定。免疫30d后攻毒試驗,每尾鯽魚經(jīng)腹腔注射500 ul的1.0×107TCID50ml-1的CyHV-2活病毒,持續(xù)觀察14d,記錄魚體死亡情況,評價不同劑量疫苗...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表（按字母順序排列）
第一章 文獻綜述
    1 鯉皰疹病毒II型研究進展
        1.1 國內(nèi)外流行現(xiàn)狀
        1.2 鯽造血器官壞死癥流行病學研究
            1.2.1 鯽造血器官壞死癥的臨床癥狀
            1.2.2 鯽造血器官壞死癥的流行特征
        1.3 鯉皰疹病毒II型的理化和生物學特征
        1.4 鯉皰疹病毒II型的檢測技術(shù)
            1.4.1 電鏡技術(shù)
            1.4.2 細胞培養(yǎng)技術(shù)
            1.4.3 分子生物學檢測
                1.4.3.1 聚合酶鏈式反應（PCR）
                1.4.3.2 巢式PCR
                1.4.3.3 實時熒光定量PCR
                1.4.3.4 環(huán)介導等溫擴增技術(shù)
    2 魚類免疫系統(tǒng)研究
        2.1 魚類非特異性免疫
            2.1.1 血細胞
                2.1.1.1 紅細胞
                2.1.1.2 白細胞
            2.1.2 血清酶活性
                2.1.2.1 溶菌酶
                2.1.2.2 超氧化物歧化酶
            2.1.3 吞噬細胞
            2.1.4 補體
        2.2 魚類特異性免疫
            2.2.1 淋巴細胞
            2.2.2 抗體
    3 漁用疫苗的研究
        3.1 疫苗的分類
            3.1.1 傳統(tǒng)疫苗
            3.1.2 新型疫苗
        3.2 疫苗的免疫途徑
            3.2.1 注射免疫
            3.2.2 浸泡免疫
            3.2.3 口服免疫
        3.3 影響疫苗免疫效果的因素
            3.3.1 疫苗免疫原性
            3.3.2 免疫劑量
            3.3.3 免疫佐劑
    4 研究目的及意義
第二章 鯉皰疹病毒II型（CyHV-2）細胞培養(yǎng)滅活疫苗有效免疫劑量研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 病毒與細胞系
            1.1.3 實驗試劑
            1.1.4 實驗器皿
            1.1.5 實驗儀器與設備
        1.2 實驗方法
            1.2.1 細胞培養(yǎng)滅活疫苗的制備
            1.2.2 疫苗的無菌檢驗與安全性檢測
            1.2.3 疫苗有效免疫劑量的測定
            1.2.4 注射免疫與采血
            1.2.5 中和抗體效價測定
            1.2.6 攻毒試驗
        1.3 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 疫苗的無菌檢驗與安全性檢驗
        2.2 中和抗體檢測
        2.3 相對免疫保護率
    3 討論
第三章 CyHV-2 滅活疫苗注射免疫異育銀鯽效果研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 試驗魚及飼養(yǎng)條件
            1.1.2 病毒、細胞系及菌株
            1.1.3 試驗試劑
            1.1.4 試驗器皿
            1.1.5 試驗儀器與設備
            1.1.6 引物設計
        1.2 實驗方法
            1.2.1 CyHV-2 細胞培養(yǎng)滅活疫苗的制備
            1.2.2 吞噬原的制備
            1.2.3 注射免疫
            1.2.4 樣品采集與處理
                1.2.4.1 血清采集與處理
                1.2.4.2 組織采集與處理
            1.2.5 免疫指標的檢測
                1.2.5.1 血液生理指標
                1.2.5.2 吞噬細胞的吞噬活性
                1.2.5.3 血清酶活性測定
                1.2.5.4 中和抗體效價檢測
            1.2.6 Real-time PCR檢測樣品中IL-11和C3補體基因表達量
                1.2.6.1 總RNA提取和cDNA的合成
                1.2.6.2 Real-time PCR分析
            1.2.7 攻毒試驗
        1.3 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 血細胞計數(shù)
        2.2 白細胞分類計數(shù)
        2.3 吞噬細胞吞噬活性
        2.4 血清酶活性
        2.5 中和抗體效價
        2.6 免疫相關基因的表達變化
        2.7 相對免疫保護率
    3 討論
結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3821316