為探討Sox9α在中國林蛙(Rana chensinensis)成體性腺功能的維持中的作用以及辛基酚(Octylphenol, OP)對Sox9α表達(dá)的影響。本研究首先克隆了中國林蛙精巢的Sox9α基因,將其測序結(jié)果導(dǎo)入SeqMan序列拼接；分別用Blast, ORF, SignalP, ProParam, SMART, NPS@, SWISS-MODEL軟件進(jìn)行同源性分析,預(yù)測序列的開放閱讀框、信號肽、蛋白分子重量、功能結(jié)構(gòu)域、等電點、蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu)。然后,選取兩棲和爬行動物的12個物種進(jìn)行ClustalW2比對,MEGA5.1建樹,分析中國林蛙Sox9α基因的進(jìn)化地位。其次,用Semi-quantity RT-PCR檢測Sox9α在中國林蛙成體的精巢、卵巢、腎臟、肝臟、腦以及32-46期蝌蚪的表達(dá)。最后,將雄性中國林蛙成體暴露于10-5,10-6,10-7,10-8mol/L OP進(jìn)行處理,分別在10、20和30d取其精巢,用Real-time Quantity PCR技術(shù)檢測Sox9α在精巢的表達(dá)。結(jié)果與分析如下： 1.在中國林蛙成體精巢中首次擴(kuò)增到長為1580bp的So...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 烷基酚類物質(zhì)的雌激素效應(yīng)及Sox基因的研究進(jìn)展
    1.1 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的類型與分布
    1.2 OP對動物內(nèi)分泌和生殖的毒性效應(yīng)
        1.2.1 OP對類固醇激素合成的影響
        1.2.2 OP對動物的生殖毒性
    1.3 Sox基因家族的研究進(jìn)展
        1.3.1 Sox基因在脊椎動物胚胎發(fā)育中的表達(dá)
    1.4 Sox 9基因的研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的及意義
第2章 中國林蛙的Sox 9α克隆、進(jìn)化及機(jī)能分析
    2.1 前言
    2.2 材料
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 動物處理
    2.3 方法
        2.3.1 Total RNA 提取
        2.3.2 cDNA的合成
        2.3.3 引物設(shè)計與合成
        2.3.4 RT-PCR 擴(kuò)增
        2.3.5 膠體回收
        2.3.6 載體構(gòu)建
        2.3.7 質(zhì)粒提取
        2.3.8 質(zhì)粒酶切
        2.3.9 功能結(jié)構(gòu)域預(yù)測及進(jìn)化樹構(gòu)建
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 Sox 9α基因的克隆
        2.4.2 序列拼接及比對
        2.4.3 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.4.4 ClustalW2分析及進(jìn)化樹構(gòu)建
        2.4.5 Sox9α mRNA的組織表達(dá)
    2.5 討論
第3章 辛基酚對中國林蛙精巢Sox 9α表達(dá)的影響
    3.1 前言
    3.2 材料
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 動物處理
    3.3 方法
        3.3.1 Total RNA 提取
        3.3.2 cDNA 的合成
        3.3.3 引物設(shè)計與合成
        3.3.4 RT-PCR 及測序
        3.3.5 實時定量PCR
        3.3.6 Sox 9α探針合成
        3.3.7 原位雜交
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 RT-PCR及測序
        3.4.2 實時定量PCR
        3.4.3 Sox 9α RNA探針合成
        3.4.4 Sox 9α 的細(xì)胞定位
    3.5 討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間研究成果



本文編號：3821510