蛻皮激素在蝦蟹類動物的性別分化、生長發(fā)育和繁殖中具有關(guān)鍵的調(diào)控作用,然而其分子調(diào)控機(jī)制尚不明確。開展蛻皮激素信號途徑的研究,對于闡明甲殼類動物的蛻皮機(jī)制,促進(jìn)蝦蟹養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有重要意義。SNIP1（Smad nuclear interacting protein）是一個與Smad相互作用并含有多個鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白,具有特異性的DNA結(jié)合活性,參與了多個信號通路的調(diào)控。克氏原螯蝦,也稱小龍蝦,因肉味鮮美廣受人們歡迎,近年來已經(jīng)成為重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。本研究旨在探討SNIP1在克氏原螯蝦蛻皮激素信號通路中的功能,取得的主要結(jié)果如下:1、本實驗根據(jù)已有部分序列,設(shè)計特異性引物克隆了克氏原螯蝦Smad核互作蛋白1（SNIP1）基因的開放式閱讀框序列（ORF,open reading frame）,生物信息學(xué)分析表明SNIP1基因的開放式閱讀框序列全長為867bp,編碼的蛋白質(zhì)含有288個氨基酸殘基,預(yù)測的成熟蛋白理論分子量分子量為34.9KDa,其等電點為6.18。其蛋白質(zhì)C末端具有高度保守的FHA結(jié)構(gòu)域,而其N端具有一段核定位序列,進(jìn)化樹分析表明克氏原螯蝦SNIP1基因與無脊椎動物SNIP1... 

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 SNIP1基因的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 SNIP1的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 SNIP1的結(jié)構(gòu)
        1.1.3 SNIP1及其相關(guān)聯(lián)蛋白的功能
    1.2 甲殼動物蛻皮的調(diào)節(jié)機(jī)制
        1.2.1 X-器官竇腺復(fù)合體及Y-器官
        1.2.2 蛻皮激素
        1.2.3 蛻皮抑制激素
        1.2.4 蛻皮激素響應(yīng)基因
2 引言
    2.1 研究的目的及意義
    2.2 研究內(nèi)容
        2.2.1 SNIP1基因序列的克隆
        2.2.2 SNIP1基因的原核表達(dá)及多抗制備
        2.2.3 SNIP1基因的表達(dá)分析
        2.2.4 蛻皮激素對SNIP1表達(dá)的影響
        2.2.5 SNIP1基因干擾對蛻皮激素響應(yīng)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
    2.3 技術(shù)路線
3 材料與方法
    3.1 實驗材料
    3.2 儀器與試劑
        3.2.1 主要實驗儀器
        3.2.2 主要生化試劑
        3.2.3 常用溶液的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 SNIP1基因的克隆
        3.3.2
        3.3.3 重組蛋白檢測及純化
        3.3.4 多克隆抗體制備
        3.3.5 SNIP1的表達(dá)分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 總RNA的檢測
    4.2 SNIP1基因序列分析
    4.3 SNIP1基因的ORF序列擴(kuò)增
    4.4 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.4.1 目的片段的克隆鑒定
        4.4.2 雙酶切鑒定
        4.4.3 菌落PCR鑒定
    4.5 重組SNIP1蛋白的表達(dá)及純化
        4.5.1 SDS-PAGE檢測
        4.5.2 重組蛋白純化
        4.5.3 Western blot分析
    4.6 多克隆抗體制備
        4.6.1 BCA法蛋白定量
    4.7 SNIP1的表達(dá)分析
        4.7.1 SNIP1基因的組織定量
        4.7.2 注射蛻皮激素對SNIP1基因表達(dá)量影響
        4.7.3 SNIP1 RNA干擾對蛻皮激素響應(yīng)基因表達(dá)水平的影響
5 討論
    5.1 克氏原螯蝦SNIP1序列分析
    5.2 克氏原螯蝦SNIP1的原核表達(dá)
    5.3 熒光定量PCR和Western Blot
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡介
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況



本文編號：3703158