近年來,羅非魚鏈球菌病嚴(yán)重危害我國(guó)羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè),目前尚無有效防治措施。通過疫苗預(yù)防是一種可行辦法。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn),無乳鏈球菌C5a肽酶（Scp B）蛋白免疫羅非魚后,能顯著提高羅非魚對(duì)無乳鏈球菌的抵抗力,且能增強(qiáng)其非特異免疫能力。補(bǔ)體C3是連接特異性免疫和非特異免疫的橋梁,通過克隆羅非魚補(bǔ)體C3基因,并了解其在Scp B免疫前后的組織表達(dá)特點(diǎn),可為進(jìn)一步研究Scp B蛋白抗無乳鏈球菌感染的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。補(bǔ)體C3（Complement component C3）是補(bǔ)體系統(tǒng)的中心效應(yīng)分子,在魚類抗病原感染中發(fā)揮重要作用。為研究羅非魚補(bǔ)體C3在抗無乳鏈球菌感染中的作用,本實(shí)驗(yàn)克隆了羅非魚補(bǔ)體C3基因,并對(duì)其氨基酸序列、理化特性及組織表達(dá)特點(diǎn)進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示,羅非魚補(bǔ)體C3基因c DNA序列（Gen Bank登錄號(hào):KU977109）為6994bp,ORF區(qū)全長(zhǎng)5361bp,共編碼1786個(gè)氨基酸;通過電子克隆獲得羅非魚補(bǔ)體C3基因組DNA 32250bp,包含外顯子44個(gè)和內(nèi)含子43個(gè)。羅非魚補(bǔ)體C3蛋白分子量為200.14k Da,等電點(diǎn)為7.11,為疏水性蛋白;補(bǔ)體C3... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
    1 補(bǔ)體C3研究進(jìn)展
    2 羅非魚鏈球菌病疫苗的研究進(jìn)展
        2.1 滅活疫苗
        2.2 弱毒疫苗
        2.3 基因工程亞單位疫苗
        2.4 DNA疫苗
    3 無乳鏈球菌C5a肽酶（Scp B）研究進(jìn)展
    4. 本研究的目的意義及技術(shù)路線
第一章 尼羅羅非魚補(bǔ)體C3基因的克隆及序列分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)魚
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 引物設(shè)計(jì)
            1.2.2 尼羅羅非魚組織總RNA提取
            1.2.3 cDNA合成
            1.2.4 補(bǔ)體C3基因的c DNA克隆及驗(yàn)證
            1.2.5 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠回收
            1.2.6 PCR純化產(chǎn)物的克隆
            1.2.7 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            1.2.8 陽性菌落檢測(cè)及測(cè)序
            1.2.9 補(bǔ)體C3序列分析
            1.2.10 補(bǔ)體C3氨基酸序列同源性比較
    2 結(jié)果
        2.1 尼羅羅非魚組織總RNA的提取
        2.2 補(bǔ)體C3基因的c DNA克隆
        2.3 同源比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3 討論
第二章 Scp B免疫及GBS人工感染前后的羅非魚補(bǔ)體C3的組織表達(dá)分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)魚及免疫蛋白
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 Scp B蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及包涵體復(fù)性
            1.2.2 重組蛋白純化
            1.2.3 Scp B蛋白的Western blot分析
            1.2.4 Scp B蛋白疫苗制備
            1.2.5 羅非魚補(bǔ)體C3基因組織表達(dá)分析
            1.2.6 Scp B免疫及GBS人工感染后的組織表達(dá)分析
    2 結(jié)果
        2.1 Scp B蛋白疫苗制備
        2.2 健康尼羅羅非魚補(bǔ)體C3基因的組織表達(dá)
        2.3 Scp B免疫及GBS人工感染后的組織表達(dá)分析
    3 討論
第三章 補(bǔ)體C3肝臟組織定位分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 RNA探針制備
            1.2.2 組織包埋與冷凍切片
            1.2.3 原位雜交實(shí)驗(yàn)
    2 結(jié)果
        2.1 RNA探針構(gòu)建
        2.2 補(bǔ)體C3基因在肝臟組織定位分析
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄一 縮略詞表
附錄二 在研期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水產(chǎn)疫苗研究開發(fā)現(xiàn)狀與趨勢(shì)分析[J]. 王忠良,王蓓,魯義善,吳灶和.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(06)
[2]大黃魚（Larimichthys crocea）補(bǔ)體C3和C4基因的分子特征及表達(dá)分析[J]. 王海玲,祁鵬志,郭寶英,吳常文.  海洋與湖沼. 2015(01)
[3]補(bǔ)體C3結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J]. 昝琦,劉欣,逄越,李慶偉.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2014(04)
[4]羅非魚無乳鏈球菌LrrG蛋白的原核表達(dá)及免疫原性分析[J]. 陳雪,可小麗,盧邁新,劉志剛,高風(fēng)英,朱華平,曹建萌.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2014(05)
[5]羅非魚無乳鏈球菌C5a肽酶（ScpB）的原核表達(dá)及其免疫原性[J]. 李慶勇,可小麗,盧邁新,朱華平,高風(fēng)英,劉志剛.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2014(01)
[6]DNA疫苗的研究進(jìn)展[J]. 楊海,王芳宇.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2013(01)
[7]魚用基因工程疫苗研究進(jìn)展[J]. 田園園,葉星.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2012(05)
[8]羅非魚無乳鏈球菌Sip基因的克隆、表達(dá)及免疫原性分析[J]. 黎炯,葉星,可小麗,盧邁新,遲妍妍,田園園.  水生生物學(xué)報(bào). 2012(04)
[9]海豚鏈球菌疫苗對(duì)羅非魚免疫功能的影響[J]. 徐增輝,陳漢忠,陳明,李莉萍,李超,甘西,梁萬文,李曉栩,張居作.  大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(06)
[10]魚類補(bǔ)體系統(tǒng)成分及補(bǔ)體特異性和功能的研究進(jìn)展[J]. 王志平,張士璀,王光鋒.  水生生物學(xué)報(bào). 2008(05)

博士論文
[1]黃顙魚IgM分子及其表達(dá)研究[D]. 李春濤.西南大學(xué) 2012

碩士論文
[1]半滑舌鰨補(bǔ)體調(diào)控因子I的鑒定、重組表達(dá)、功能分析及C3-1基因的初步研究[D]. 向晉松.上海海洋大學(xué) 2015
[2]羅非魚無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）LrrG蛋白的原核表達(dá)及其免疫原性研究[D]. 陳雪.上海海洋大學(xué) 2014
[3]羅非魚無乳鏈球菌C5a肽酶的原核表達(dá)及其免疫原性研究[D]. 李慶勇.上海海洋大學(xué) 2013
[4]尼羅羅非魚MHCII類基因的克隆與表達(dá)特征及多態(tài)性研究[D]. 龐紀(jì)彩.上海海洋大學(xué) 2013
[5]羅非魚源無乳鏈球菌滅活疫苗的研制及其免疫效果的研究[D]. 陳賀.廣東海洋大學(xué) 2012
[6]鮸魚三種先天免疫基因克隆及分子進(jìn)化研究[D]. 孟繁星.浙江海洋學(xué)院 2012
[7]羅非魚無乳鏈球菌的分離、鑒定及重組表面免疫原性蛋白His-Sip的免疫效果初步研究[D]. 黎炯.上海海洋大學(xué) 2011
[8]文昌魚和斑馬魚C1q、C3及G10的進(jìn)化分析及基因表達(dá)的研究[D]. 張寧.山東大學(xué) 2009
[9]海豚鏈球菌（Streptococcus iniae）疫苗對(duì)淡、海水養(yǎng)殖魚類的保護(hù)性試驗(yàn)[D]. 張生.西南大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3666816