近年來隨著養(yǎng)殖業(yè)的需要，烏鱧（Channa argu）逐漸成為國內(nèi)的特種養(yǎng)殖品種。為提高烏鱧子代雄性率及開展烏鱧的單性養(yǎng)殖，本研究采用RT-PCR和RACE的方法克隆出了烏鱧的Dmrt1基因和Dmrt4的部分基因，并對(duì)Dmrt1的表達(dá)特性進(jìn)行了具體的分析，這將有助于了解烏鱧的性別決定機(jī)制。Dmrt基因是涉及到性別決定和分化的保守基因家族，它廣泛存在于不同物種中。本研究通過使用簡(jiǎn)并引物從烏鱧的基因組DNA中獲得了Dmrt1的保守域DM1及Dmrt4的保守域DM4，對(duì)DM結(jié)構(gòu)域進(jìn)行測(cè)序，通過比對(duì)確定為Dmrt基因的保守域。根據(jù)獲得的保守域序列，設(shè)計(jì)3’RACE和5’RACE的引物，采用RACE的方法擴(kuò)增Dmrt的全長(zhǎng)cDNA。在烏鱧的精巢組織克隆得到烏鱧Dmrt1基因的cDNA序列，并采用半定量和定量的手段對(duì)Dmrt1mRNA在烏鱧成魚中不同組織的表達(dá)差異進(jìn)行分析。研究獲得的烏鱧Dmrt1基因cDNA全長(zhǎng)為1573bp，5’端非翻譯區(qū)25bp，編碼266個(gè)氨基酸的800bp的開放閱讀框，747bp含有脊椎動(dòng)物典型的多腺苷酸化加尾信號(hào)AATAAA的3’端非翻譯區(qū)。通過對(duì)氨基酸序列的同源性進(jìn)行... 

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1 烏鱧的養(yǎng)殖情況和其研究意義
    2 魚類的性別決定
        2.1 魚類的性別及性染色體
        2.2 魚類性別決定相關(guān)因素
    3 Dmrt 基因的研究現(xiàn)狀
        3.1 Dmrt 基因的發(fā)現(xiàn)
        3.2 魚類 Dmrt 基因的研究現(xiàn)狀
    4 本論文的研究意義
        4.1 理論意義
        4.2 生產(chǎn)意義
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與儀器
            1.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
            1.2.2 主要實(shí)驗(yàn)藥品和配制方法
        1.3 引物設(shè)計(jì)與合成
            1.3.1 DM 區(qū)的引物
            1.3.2 3′RACE 引物
            1.3.3 5′RACE 引物
            1.3.4 驗(yàn)證 Dmrt1 全長(zhǎng)的引物
            1.3.5 用于定量分析的引物
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 烏鱧基因組 DNA 的提取
        2.2 烏鱧精巢總 RNA 的提取
        2.3 瓊脂糖凝膠電泳
        2.4 瓊脂糖凝膠中回收 DNA
        2.5 PCR 擴(kuò)增 DM 結(jié)構(gòu)域
        2.6 烏鱧總 RNA 的反轉(zhuǎn)錄
        2.7 3′RACE 擴(kuò)增 Dmrt 的 3′端
        2.8 5′RACE 擴(kuò)增 Dmrt 的 5′端
        2.9 PCR 產(chǎn)物的連接反應(yīng)
        2.10 重組質(zhì)粒的篩選
        2.11 菌種的保存
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 烏鱧基因組 DNA 的提取
    2 烏鱧精巢總 RNA 的提取
    3 DM-domain 區(qū)的擴(kuò)增
    4 Dmrt1 基因的序列分析
        4.1 Dmrt1 保守域的比對(duì)
        4.2 烏鱧Dmrt1基因的3′RACE和5′RACE
        4.3 烏鱧 Dmrt1 氨基酸的同源性分析
        4.4 烏鱧 Dmrt1 系統(tǒng)樹的分析
        4.5 Dmrt1 基因在成體烏鱧不同組織的表達(dá)
    5 Dmrt4 基因的序列分析
        5.1 Dmrt4 保守域的對(duì)比
        5.2 烏鱧 Dmrt4 基因的 5′RACE
第4章 討論
    1 烏鱧 Dmrt1 基因結(jié)構(gòu)、表達(dá)
    2 烏鱧 Dmrt4 基因結(jié)構(gòu)
    3 Dmrt 家族的特點(diǎn)
    4 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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