熱激反應(yīng)相關(guān)基因?qū)C體在高溫及缺氧應(yīng)激條件下啟動熱休克反應(yīng)具有重要作用。本研究通過簡并引物擴增、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫查找并結(jié)合SMART-RACE技術(shù)成功克隆得到5條熱休克及免疫調(diào)控相關(guān)基因:熱休克轉(zhuǎn)錄因子1（heat shock transcriptional factor 1,HSF1）、熱休克因子結(jié)合蛋白1（heat shock factor binding protein 1,HSBP1）、熱休克蛋白90（heat shock protein 90,HSP90）、同種移植炎癥因子1（allograft inflammatory factor 1,AIF-1）和紫色酸性磷酸酯酶（Purple acid phosphatase,PAP）,并分別命名為HdHSF1、HdHSBP1、HdHSP90、HdAIF-1和HdPAP。采用實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)分析雜色鮑若干熱激反應(yīng)基因在高溫和缺氧應(yīng)激過程中的變化。通過培養(yǎng)雜色鮑血細(xì)胞,運用RNAi技術(shù)對HdHSF1干擾后,檢測其它熱休克相關(guān)基因的表達(dá)情況并作分析。主要的研究結(jié)果如下:（1）HdHSF1的cDNA全長為2134 bp,編碼5... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
基因名稱英文縮略詞表
第1章 引言
    1.1 應(yīng)激及應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生
        1.1.1 應(yīng)激的類型
        1.1.2 熱應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生
        1.1.3 缺氧應(yīng)激的發(fā)生
    1.2 熱休克轉(zhuǎn)錄因子1的熱啟動調(diào)控作用
    1.3 熱休克因子結(jié)合蛋白1參與熱休克調(diào)控
    1.4 熱休克蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用
    1.5 熱激信號傳導(dǎo)途徑
    1.6 生物耐熱性獲得
    1.7 本研究的目的與意義
    1.8 主要研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.8.1 主要研究內(nèi)容
        1.8.2 主要技術(shù)路線
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑和儀器
        2.1.3 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 總RNA的提�。≧DP法）和去除DNA的污染
        2.2.2 合成RT-PCR cDNA第一鏈和PCR擴增獲取基因cDNA片段
        2.2.3 SMART-RACE技術(shù)獲取基因全長
        2.2.4 割膠純化基因片段
        2.2.5 與質(zhì)粒載體連接
        2.2.6 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化及篩選
        2.2.7 質(zhì)粒插入片段的檢測
        2.2.8 質(zhì)粒測序
        2.2.9 目的基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.10 RNA干擾實驗
        2.2.11 實時熒光定量PCR反應(yīng)體系及條件
第3章 結(jié)果
    3.1 雜色鮑各組織總RNA的抽提結(jié)果
    3.2 HdHSF1、HdHSBP1、HdHSP90、HdAIF-1 和HdPAP基因序列分析
    3.3 HdHSF1、HdHSBP1、HdHSP90、HdAIF-1 和HdPAP基因各組織表達(dá)
    3.4 熱休克及免疫相關(guān)基因在應(yīng)激情況下的表達(dá)
        3.4.1 高溫和缺氧應(yīng)激下熱休克及免疫相關(guān)基因的表達(dá)
        3.4.2 其它若干熱休克相關(guān)基因的應(yīng)激表達(dá)情況
    3.5 熱休克及免疫相關(guān)基因在HdHSF1干擾下的表達(dá)情況
第4章 討論
    4.1 熱休克轉(zhuǎn)錄因子 1、熱休克因子結(jié)合蛋白1和熱休克蛋白 90
    4.2 同種移植炎癥因子 1
    4.3 紫色酸性磷酸酯酶
    4.4 其它熱休克相關(guān)蛋白
第5章 結(jié)論和展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和研究成果
    1. 發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
    2. GenBank注冊的功能基因


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛋雞常用抗熱應(yīng)激的添加劑[J]. 張君.  養(yǎng)殖技術(shù)顧問. 2012(04)
[2]溫度對雜色鮑不同群體生長率與存活率的影響[J]. 游偉偉,林煥陽,駱軒,王德祥,林壯炳,柯才煥.  臺灣海峽. 2011(04)
[3]雜色鮑的遺傳育種研究進(jìn)展[J]. 柯才煥,游偉偉.  廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2011(02)
[4]DAD1和AIF-1細(xì)胞因子在魚類中的研究進(jìn)展[J]. 王利,吳信忠.  中國水產(chǎn)科學(xué). 2011(01)
[5]熱休克因子結(jié)合蛋白（HSBP1）的表達(dá)、純化、結(jié)晶與初步晶體學(xué)研究（英文）[J]. 張紅彥,劉學(xué)琦,孫玉娜,郝寧,李雪梅,婁智勇.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2010(04)
[6]熱休克轉(zhuǎn)錄因子1與機體耐熱性的相關(guān)研究[J]. 王延久,王長法,鞠志花,何劍斌,黃金明,李建斌,仲躋峰,李秋玲.  生物技術(shù)通報. 2010(03)
[7]熱休克轉(zhuǎn)錄因子1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[J]. 李祎,王葵.  臨床醫(yī)藥實踐. 2009(19)
[8]中國海洋溢油污染現(xiàn)狀及其生態(tài)影響研究[J]. 王傳遠(yuǎn),賀世杰,李延太,侯西勇,楊翠云.  海洋科學(xué). 2009(06)
[9]雜色鮑對高溫和低鹽耐受力的初步研究[J]. 劉賢德,閆玉華,王志勇,蔡明夷,柯才煥.  集美大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2008(04)
[10]HSF1生理特征及調(diào)控HSP表達(dá)的研究進(jìn)展[J]. 徐雪,馬中富,黃帆.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2008(09)

博士論文
[1]刺參Apostichopus japonicus （Selenka）對溫度脅迫響應(yīng)分子機理的基礎(chǔ)研究[D]. 趙歡.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2011
[2]刺參（Apostichopus Japonicus）對溫度變化的生態(tài)生理學(xué)響應(yīng)機制[D]. 紀(jì)婷婷.中國海洋大學(xué) 2009

碩士論文
[1]雜色鮑若干免疫相關(guān)基因的克隆和分析[D]. 王寶珍.集美大學(xué) 2009
[2]若干大黃魚性腺發(fā)育相關(guān)基因的克隆與表達(dá)[D]. 周鵬.集美大學(xué) 2009
[3]雜色鮑sod、cat和mpeg基因的克隆與分析[D]. 張克烽.集美大學(xué) 2007
[4]大黃魚抗病功能基因的克隆與分析[D]. 謝芳靖.集美大學(xué) 2007
[5]環(huán)境脅迫對凡納濱對蝦行為和生理活動的影響[D]. 周小壯.暨南大學(xué) 2005



本文編號：3642330