多倍體鯽鯉雄性育性機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間:2022-02-24 10:32
自然界中,多倍化現(xiàn)象存在于多種生物體中,在新物種形成和物種進(jìn)化中具有重要的意義。對多倍體生物和多倍體化現(xiàn)象的研究,是非常有價(jià)值的,它不僅有利于研究多倍化在生物進(jìn)化理論中的重要作用,對于動植物中的多倍體育種也具有重要的指導(dǎo)意義。在作者實(shí)驗(yàn)室以往多年的研究中,進(jìn)行了雌性紅鯽(Carassius auratus red var.)(2n=100)與雄性鯉(Cyprinus carpio)(2n=100)雜交,獲得F3-F24的異源四倍體魚(4n=200)。雄性和雌性四倍體個(gè)體都是可育的。然后,雄性四倍體與雌性二倍體紅鯽倍間雜交獲得不育的三倍體魚。四倍體鯽鯉(AT)的精巢發(fā)育正常并且能穩(wěn)定地產(chǎn)生正常的二倍體精子,而三倍體魚的精巢雖然能正常的發(fā)育,但是不能產(chǎn)生正常的精子。雄性三倍體鯽鯉中生殖細(xì)胞能發(fā)育至圓形的精細(xì)胞階段,然后退化。不育的三倍體魚和可育的四倍體魚群體的獲得,為研究倍性的改變對魚類育性的影響機(jī)制提供了不可多得的寶貴的材料。此外,人工兩性可育四倍體品系在魚類中是首次獲得,并且可能是脊椎動物中的第一個(gè),為我們研究雜交導(dǎo)致的多倍化現(xiàn)象也是非常有意...
【文章來源】:湖南師范大學(xué)湖南省211工程院校
【文章頁數(shù)】:155 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 組學(xué)的研究進(jìn)展及應(yīng)用
1.1.1 轉(zhuǎn)錄組與轉(zhuǎn)錄組學(xué)
1.1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)
1.1.3 代謝組等其它類別的組學(xué)
1.2 多倍體動物育性機(jī)制的研究
1.2.1 四倍體魚育性的研究及應(yīng)用
1.2.2 三倍體魚育性的研究及應(yīng)用
1.3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在精子發(fā)生中的研究及進(jìn)展
1.4 蛋白質(zhì)組學(xué)在精子蛋白質(zhì)組成的研究
1.5 本研究的目的和意義
第二章 雄性三倍體不育分子機(jī)制的研究
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1 材料
2.1.2 主要藥品、試劑和酶
2.1.3 主要儀器設(shè)備
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 構(gòu)建cDNA文庫及轉(zhuǎn)錄組測序
2.2.2 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)生物信息學(xué)分析
2.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
2.2.4 精巢組織的電鏡觀察
2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
2.3.1 不同倍性魚精巢RNA-seq測序與組裝結(jié)果
2.3.2 不同倍性魚精巢轉(zhuǎn)錄基因注釋結(jié)果統(tǒng)計(jì)
2.3.3 二、三倍體魚差異表達(dá)基因
2.3.4 四、三倍體魚差異表達(dá)基因
2.3.5 二、四倍體與三倍體魚共同差異表達(dá)基因
2.3.6 鞭毛合成基因在三種不同倍性魚的表達(dá)模式
2.3.7 轉(zhuǎn)錄因子在三種不同倍性魚的表達(dá)模式
2.3.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR對三倍體精巢中差異表達(dá)基因的驗(yàn)證
2.3.9 不同倍性魚精巢組織電鏡觀察
2.4 討論
2.4.1 三種魚精巢基因表達(dá)模式分析
2.4.2 三倍體中差異表達(dá)基因?qū)影l(fā)生的影響
2.4.3 三倍體中鞭毛合成基因差異表達(dá)對精子發(fā)生的影響
2.4.4 三倍體中轉(zhuǎn)錄因子差異表達(dá)對精子發(fā)生的影響
第三章 雄性四倍體魚繁殖特性改變的分子機(jī)制研究
3.1 二、四倍體魚精巢轉(zhuǎn)錄組分析
3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.1.1.1 材料
3.1.1.2 主要藥品、試劑和酶
3.1.1.3 主要儀器設(shè)備
3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
3.1.3.1 二、四倍體魚差異表達(dá)基因
3.1.3.2 二、四倍體魚精巢差異表達(dá)基因的注釋
3.1.4 討論
3.1.4.1 四倍體中差異表達(dá)基因可能對精子發(fā)生的影響
3.2 雄性四倍體魚精子和鯉魚單倍體精子蛋白質(zhì)組學(xué)分析
3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.2.1.1 材料
3.2.1.2 主要藥品、試劑和酶
3.2.1.3 主要配制溶液方法
3.2.1.4 主要儀器設(shè)備
3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.2.2.1 精液中精子的分離和收集
3.2.2.2 不同倍性精子DNA含量測定
3.2.2.3 不同倍性精子活力測定
3.2.2.4 不同倍性精子總蛋白的提取和純化
3.2.2.5 不同倍性精子提取總蛋白濃度的測定
3.2.2.6 SDS-PAGE雙向凝膠電泳
3.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
3.2.3.1 不同倍性精子DNA含量檢測
3.2.3.2 不同倍性精子活力檢測
3.2.3.3 兩種精子的差異表達(dá)蛋白2-DE圖譜的構(gòu)建及分析
3.2.3.4 兩種倍性精子差異蛋白質(zhì)譜結(jié)果
3.2.3.5 轉(zhuǎn)錄組CDS序列進(jìn)行差異蛋白質(zhì)進(jìn)一步鑒定
3.2.3.6 差異蛋白質(zhì)的注釋分析
3.2.4 討論
3.2.4.1 不同倍性精子生理學(xué)差異
3.2.4.2 兩種不同倍性精子差異蛋白質(zhì)功能分析
第四章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
博士學(xué)習(xí)期間撰寫、發(fā)表的主要論文
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]基于高通量轉(zhuǎn)錄組測序的山羊睪丸和附睪頭差異表達(dá)基因分析[J]. 張春香,張國林,郭麗娜,趙輝,任有蛇. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(03)
[2]多倍體生物研究進(jìn)展[J]. 宋燦,劉少軍,肖軍,何偉國,周毅,覃欽博,張純,劉筠. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2012(03)
[3]半滑舌鰨四倍體魚苗的誘導(dǎo)與鑒定[J]. 李文龍,陳松林,季相山,謝明樹,徐營,鄧寒. 中國水產(chǎn)科學(xué). 2012(02)
[4]魚類人工多倍體育種的研究進(jìn)展[J]. 孫遠(yuǎn)東,譚立軍,唐新科,李自君. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(09)
[5]A new type of triploid crucian crap—red crucian carp (♀)×allotetraploid (♂)[J]. SHEN Jiamin, LIU Shaojun**, SUN Yuandong, ZHANG Chun, LUO Kaikun, TAO Min, ZENG Chen and LIU Yun(Key Laboratory of Protein Chemistry and Developmental Biology of State Ministry of China, College of Life Science, Hunan Normal University, Changsha 410081, China). Progress in Natural Science. 2006(12)
[6]富集低豐度蛋白的人類精子全蛋白二維電泳整合圖的建立[J]. 孫波瀾,范立青,李凌偉,朱文兵,盧光琇. 中華男科學(xué)雜志. 2006(04)
[7]四倍體鯽鯉、三倍體湘云鯽染色體減數(shù)分裂觀察(英文)[J]. 張純,何曉曉,劉少軍,孫遠(yuǎn)東,劉筠. 動物學(xué)報(bào). 2005(01)
[8]細(xì)胞周期調(diào)控基因在精子發(fā)生中的作用[J]. 李丹,盧光琇. 國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊. 2005(01)
[9]應(yīng)用雙向電泳技術(shù)初步建立人精子頭部蛋白質(zhì)圖譜[J]. 譚玉梅,范立青,羅克莉,朱文兵,盧光琇. 中華男科學(xué)雜志. 2004(12)
[10]三倍體鯽魚——異源四倍體鯽鯉 (♂ )×金魚 (♀ )[J]. 劉少軍,孫遠(yuǎn)東,張純,羅凱坤,劉筠. 遺傳學(xué)報(bào). 2004(01)
碩士論文
[1]水牛精液蛋白質(zhì)組學(xué)的相關(guān)研究[D]. 楊麗.廣西大學(xué) 2012
[2]綿羊精子冷凍前后差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 李鴻巖.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]山羊精子蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)體系優(yōu)化及凍融前后精子差異蛋白分析[D]. 阮崇美.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]奶牛X、Y精子比較蛋白質(zhì)組學(xué)的條件優(yōu)化及初步研究[D]. 韓偉東.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
本文編號:3642543
【文章來源】:湖南師范大學(xué)湖南省211工程院校
【文章頁數(shù)】:155 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 組學(xué)的研究進(jìn)展及應(yīng)用
1.1.1 轉(zhuǎn)錄組與轉(zhuǎn)錄組學(xué)
1.1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)
1.1.3 代謝組等其它類別的組學(xué)
1.2 多倍體動物育性機(jī)制的研究
1.2.1 四倍體魚育性的研究及應(yīng)用
1.2.2 三倍體魚育性的研究及應(yīng)用
1.3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在精子發(fā)生中的研究及進(jìn)展
1.4 蛋白質(zhì)組學(xué)在精子蛋白質(zhì)組成的研究
1.5 本研究的目的和意義
第二章 雄性三倍體不育分子機(jī)制的研究
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1 材料
2.1.2 主要藥品、試劑和酶
2.1.3 主要儀器設(shè)備
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 構(gòu)建cDNA文庫及轉(zhuǎn)錄組測序
2.2.2 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)生物信息學(xué)分析
2.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
2.2.4 精巢組織的電鏡觀察
2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
2.3.1 不同倍性魚精巢RNA-seq測序與組裝結(jié)果
2.3.2 不同倍性魚精巢轉(zhuǎn)錄基因注釋結(jié)果統(tǒng)計(jì)
2.3.3 二、三倍體魚差異表達(dá)基因
2.3.4 四、三倍體魚差異表達(dá)基因
2.3.5 二、四倍體與三倍體魚共同差異表達(dá)基因
2.3.6 鞭毛合成基因在三種不同倍性魚的表達(dá)模式
2.3.7 轉(zhuǎn)錄因子在三種不同倍性魚的表達(dá)模式
2.3.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR對三倍體精巢中差異表達(dá)基因的驗(yàn)證
2.3.9 不同倍性魚精巢組織電鏡觀察
2.4 討論
2.4.1 三種魚精巢基因表達(dá)模式分析
2.4.2 三倍體中差異表達(dá)基因?qū)影l(fā)生的影響
2.4.3 三倍體中鞭毛合成基因差異表達(dá)對精子發(fā)生的影響
2.4.4 三倍體中轉(zhuǎn)錄因子差異表達(dá)對精子發(fā)生的影響
第三章 雄性四倍體魚繁殖特性改變的分子機(jī)制研究
3.1 二、四倍體魚精巢轉(zhuǎn)錄組分析
3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.1.1.1 材料
3.1.1.2 主要藥品、試劑和酶
3.1.1.3 主要儀器設(shè)備
3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
3.1.3.1 二、四倍體魚差異表達(dá)基因
3.1.3.2 二、四倍體魚精巢差異表達(dá)基因的注釋
3.1.4 討論
3.1.4.1 四倍體中差異表達(dá)基因可能對精子發(fā)生的影響
3.2 雄性四倍體魚精子和鯉魚單倍體精子蛋白質(zhì)組學(xué)分析
3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.2.1.1 材料
3.2.1.2 主要藥品、試劑和酶
3.2.1.3 主要配制溶液方法
3.2.1.4 主要儀器設(shè)備
3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.2.2.1 精液中精子的分離和收集
3.2.2.2 不同倍性精子DNA含量測定
3.2.2.3 不同倍性精子活力測定
3.2.2.4 不同倍性精子總蛋白的提取和純化
3.2.2.5 不同倍性精子提取總蛋白濃度的測定
3.2.2.6 SDS-PAGE雙向凝膠電泳
3.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
3.2.3.1 不同倍性精子DNA含量檢測
3.2.3.2 不同倍性精子活力檢測
3.2.3.3 兩種精子的差異表達(dá)蛋白2-DE圖譜的構(gòu)建及分析
3.2.3.4 兩種倍性精子差異蛋白質(zhì)譜結(jié)果
3.2.3.5 轉(zhuǎn)錄組CDS序列進(jìn)行差異蛋白質(zhì)進(jìn)一步鑒定
3.2.3.6 差異蛋白質(zhì)的注釋分析
3.2.4 討論
3.2.4.1 不同倍性精子生理學(xué)差異
3.2.4.2 兩種不同倍性精子差異蛋白質(zhì)功能分析
第四章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
博士學(xué)習(xí)期間撰寫、發(fā)表的主要論文
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]基于高通量轉(zhuǎn)錄組測序的山羊睪丸和附睪頭差異表達(dá)基因分析[J]. 張春香,張國林,郭麗娜,趙輝,任有蛇. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(03)
[2]多倍體生物研究進(jìn)展[J]. 宋燦,劉少軍,肖軍,何偉國,周毅,覃欽博,張純,劉筠. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2012(03)
[3]半滑舌鰨四倍體魚苗的誘導(dǎo)與鑒定[J]. 李文龍,陳松林,季相山,謝明樹,徐營,鄧寒. 中國水產(chǎn)科學(xué). 2012(02)
[4]魚類人工多倍體育種的研究進(jìn)展[J]. 孫遠(yuǎn)東,譚立軍,唐新科,李自君. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(09)
[5]A new type of triploid crucian crap—red crucian carp (♀)×allotetraploid (♂)[J]. SHEN Jiamin, LIU Shaojun**, SUN Yuandong, ZHANG Chun, LUO Kaikun, TAO Min, ZENG Chen and LIU Yun(Key Laboratory of Protein Chemistry and Developmental Biology of State Ministry of China, College of Life Science, Hunan Normal University, Changsha 410081, China). Progress in Natural Science. 2006(12)
[6]富集低豐度蛋白的人類精子全蛋白二維電泳整合圖的建立[J]. 孫波瀾,范立青,李凌偉,朱文兵,盧光琇. 中華男科學(xué)雜志. 2006(04)
[7]四倍體鯽鯉、三倍體湘云鯽染色體減數(shù)分裂觀察(英文)[J]. 張純,何曉曉,劉少軍,孫遠(yuǎn)東,劉筠. 動物學(xué)報(bào). 2005(01)
[8]細(xì)胞周期調(diào)控基因在精子發(fā)生中的作用[J]. 李丹,盧光琇. 國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊. 2005(01)
[9]應(yīng)用雙向電泳技術(shù)初步建立人精子頭部蛋白質(zhì)圖譜[J]. 譚玉梅,范立青,羅克莉,朱文兵,盧光琇. 中華男科學(xué)雜志. 2004(12)
[10]三倍體鯽魚——異源四倍體鯽鯉 (♂ )×金魚 (♀ )[J]. 劉少軍,孫遠(yuǎn)東,張純,羅凱坤,劉筠. 遺傳學(xué)報(bào). 2004(01)
碩士論文
[1]水牛精液蛋白質(zhì)組學(xué)的相關(guān)研究[D]. 楊麗.廣西大學(xué) 2012
[2]綿羊精子冷凍前后差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 李鴻巖.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]山羊精子蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)體系優(yōu)化及凍融前后精子差異蛋白分析[D]. 阮崇美.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]奶牛X、Y精子比較蛋白質(zhì)組學(xué)的條件優(yōu)化及初步研究[D]. 韓偉東.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
本文編號:3642543
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