對蝦是我國重要的水產養(yǎng)殖產品,具有重要的經濟意義。但其養(yǎng)殖易受如白斑綜合征病毒（white spot syndrome virus, WSSV）等病原的侵害,造成巨大的經濟損失。對蝦主要依靠先天免疫抵抗病原的侵害,因此對日本囊對蝦先天免疫防御機制的研究具有重要意義。C型凝集素（C-type lectin, CTL）是甲殼動物中一種重要的模式識別受體。本研究選取日本囊對蝦（Marsupenaeus japonicus）為實驗動物,研究了兩種含有低密度脂蛋白受體家族A結構域（LDLa, low-density lipoprotein receptor class A domain）的C型凝集素Ld1rLec1與Ld1rLec2在抗病毒免疫中的功能及可能的作用機制。LSm14A是RNA結合蛋白LSm（like-Sm）家族的一員,在抗病毒免疫中具有重要功能,本文還對日本囊對蝦中新發(fā)現(xiàn)的三種MjLSm在抗病毒免疫中的功能進行了研究。1.日本囊對蝦C型凝集素Ld1rLec1與Ld1rLec2的功能研究C型凝集素是一大類含有糖類識別結構域（CRD, carbohydrate recognition ... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

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摘要
Abstract
符號說明
第一章 無脊椎動物先天免疫與模式識別受體
    一、免疫系統(tǒng)概述
        1. 先天免疫
        2. 適應性免疫
    二、無脊椎動物先天免疫研究
        1. 體液免疫
            1.1. 血淋巴凝集
            1.2. 酚氧化酶原系統(tǒng)的激活
            1.3. 抗菌肽的產生
        2. 細胞免疫
    三、先天免疫模式識別受體
        1. 哺乳動物模式識別受體
            1.1. Toll樣受體
            1.2. RIG-Ⅰ樣受體(RIG-Ⅰ-like receptor,RLRs)
            1.3. NOD樣受體(NOD-like receptor,NLR)
            1.4. DNA識別受體
        2. 無脊椎動物模式識別受體
            2.1. 肽聚糖識別蛋白(PGRPs)
            2.2. 革蘭氏陰性菌結合蛋白(GNBPs)
            2.3. 清道夫受體(SCRs)
            2.4. 含硫脂蛋白(TEP)
            2.5. 唐氏綜合癥細胞粘附分子(DSCAM)
            2.6 半乳糖苷結合凝集素(Galectin)
            2.7. 纖維蛋白原樣結構域免疫凝集素(FBGLs)
            2.8. 絲氨酸蛋白酶同系物
            2.9. C型凝集素(CTLs)
                2.9.1 CTLD結構特征
                2.9.2 無脊椎動物CTLD
                2.9.3 甲殼動物C型凝集素
        3. 新型模式識別受體LSM14A
    四、先天免疫信號轉導及調控
        1. Toll途徑
        2. IMD途徑
        3. PGN消化酶對免疫信號通路的負調控
        4. Toll信號通路的負調節(jié)
        5. IMD信號通路的負調節(jié)
        6. 果蠅免疫反應的轉錄調節(jié)
        7. 組織特異性免疫調節(jié)
    五、本研究的意義和技術路線
第二章 日本囊對蝦兩種含有低密度脂蛋白受體家族A結構域的C型凝集素抗病毒抗菌免疫功能研究
    一、前言
    二、材料和方法
        1. 菌株、儀器、試劑和載體
        2. 實驗動物及免疫刺激
        3. RNA提取和cDNA合成
        4. 基因組DNA提取
        5. LdlrLec1與LdlrLec2 cDNA全長克隆
        6. 半定量RT-PCR與實時定量PCR(qRT-PCR)
        7. 序列信息分析
        8. LdlrLec1與LdlrLec2重組蛋白的表達和純化
        9. LdlrLec1與LdlrLec2重組蛋白抗病毒分析
        10. Pull-down
        11. dsRNA合成及體內RNA干擾
        12. SDS-PAGE及Western blot免疫印跡雜交
        13. 白斑病毒WSSV的純化
        14. 體外阻斷結合分析
        15. 微生物凝集及細菌結合實驗
    三、結果
        1. LdlrLec1與LdlrLec2全長cDNA的克隆及序列比對
        2. LdlrLec1與LdIrLec2的組織分布及表達模式
        3. LdlrLec蛋白異源寡聚化
        4. LdlrLec1與LdlrLec2具有抗WSSV功能
        5. RNA干擾LdlrLec1與LdlrLec2促進WSSV在對蝦體內的復制
        6. LdlrLec1與LdlrLec2能夠與WSSV囊膜病的VP28相互作用
        7. LdlrLec1與LdlrLec2阻斷WSSV感染血細胞
        8. LdlrLec1與LdlrLec2對細菌的結合能力分析
        9. LdlrLec1與LdlrLec2抑制枯草芽孢桿菌的生長
    四、討論
第三章 日本囊對蝦新型模式識別受體LSm抗病毒功能研究
    一、前言
    二、材料和方法
        1. 試劑、儀器、載體和菌株
        2. 實驗動物及免疫刺激
        3. RNA提取和cDNA合成
        4. 序列信息分析
        5. 重組蛋白的表達和純化
        6. Gel-shift凝膠阻滯
        7. 半定量RT-PCR與實時定量PCR(qRT-PCR)
        8. dsRNA合成及體內RNA干擾
        9. Capped mRNA合成及體內過表達
    三、結果
        1. MjLSm1、MjLSm2與MjLSm3的基因克隆與序列比對
        2. MjLSm1、MjLSm2與MjLSm3的組織分布與表達模式
        3. MjLSm1、MjLSm2與MjLSm3蛋白能夠結合WSSV dsRNA
        4. 干擾MjLSm促進WSSV在對蝦體內的復制及對甲殼肽的影響
        5. 過表達MjLSm抑制WSSV在對蝦體內的復制及對甲殼肽的影響
    四、討論
創(chuàng)新點總結
參考文獻
致謝
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本文編號：3498199