凡納濱對(duì)蝦NOS及相關(guān)因子的研究
發(fā)布時(shí)間:2021-11-04 07:48
環(huán)境溫度和病害是影響凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)健康養(yǎng)殖的重要因素。本研究通過生物化學(xué)方法研究了溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺氧代謝及能量代謝的影響;利用基因干擾技術(shù)(RNAi)初步研究了干擾NOS對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞和肝胰腺免疫功能的影響。利用RACE-PCR技術(shù)克隆了NOS下游關(guān)鍵調(diào)控因子鳥苷酸環(huán)化酶(GCIII)基因的全長(zhǎng)cDNA序列,并研究了其在對(duì)蝦不同組織中的表達(dá)譜及WSSV病毒粒子刺激后,對(duì)蝦肝胰腺、神經(jīng)組織和血細(xì)胞中GCIII基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)變化,同時(shí)利用生物化學(xué)方法分析了免疫刺激后肝胰腺NOS活力,NO及環(huán)鳥苷酸(cGMP)含量的變化;利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng),在前期獲得NOS全長(zhǎng)cDNA序列的基礎(chǔ)上,獲得了其中的NO合成結(jié)構(gòu)域重組蛋白;成功構(gòu)建了對(duì)蝦T7噬菌體展示文庫。研究結(jié)果如下:(1)通過研究低溫和高溫對(duì)肝胰腺氧代謝和能量代謝的影響,發(fā)現(xiàn)低溫及高溫脅迫均會(huì)引起肝胰腺內(nèi)O2-.含量及相應(yīng)抗氧化酶活力增加,但是不同類型的抗氧化酶可能扮演不同角色;高溫脅迫會(huì)導(dǎo)致NOS活力和NO含量顯著增加;而低溫及高溫脅...
【文章來源】:集美大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】:79 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
凡納濱對(duì)蝦外部特征圖
圖 2-1 不同溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺 O2-.含量(a),SOD 活力(b),CAT 活力(c)和 GSH 含量(d)變化的影響(n=3)“*”表示實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)與對(duì)照組數(shù)據(jù)具有顯著性差異(P < 0.05),下同2.2.2 溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺 NOS 活力及 NO 含量的影響溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織中 NOS 活力的影響如圖 2-2(a)所示。15℃脅迫 6h, NOS 活力與對(duì)照組無顯著差異,但是水溫回復(fù)至對(duì)照水平 24 h 后,NOS 活力增加,達(dá)到對(duì)照組的 1.60 倍(P < 0.05);19℃脅迫后 6 h,NOS 活力降低,僅為對(duì)照組的 57%,但是隨著溫度恢復(fù) NOS 活力也恢復(fù);31℃高溫脅迫引起 NOS 活力下降,脅迫 6 h 后其活力為對(duì)照組的 76%,但是隨著溫度恢復(fù),NOS 活力顯著上升,24 h 時(shí)達(dá)到對(duì)照組的 1.74倍(P < 0.05);35℃脅迫導(dǎo)致 NOS 活力在 6 h 時(shí)增加,為對(duì)照組的 1.22 倍,并且在溫度恢復(fù) 24 h 后,NOS 活力為對(duì)照組的 2.59 倍(P < 0.05)。溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織中 NO 含量的影響如圖 2-2(b)所示,15 與 19℃低溫脅迫 6 h 時(shí),實(shí)驗(yàn)組 NO 含量與對(duì)照組相比無顯著差異,當(dāng)回復(fù)至對(duì)照溫度 24 h 后,19℃脅迫實(shí)驗(yàn)組 NO 含量顯著降低,僅為對(duì)照組的 20%(P < 0.05);31 和 35℃脅迫 6 h
圖 2-2 不同溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺 NOS(a)活力和 NO(b)生成量的影響(n=3)2.2.3 溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺 ATP 含量的影響溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織中 ATP 含量的影響如圖 2-3 所示,15℃脅迫 6 h 后ATP 含量顯著高于對(duì)照組,為對(duì)照組的 1.57 倍(P < 0.05),但是溫度回復(fù)至對(duì)照水平 24 h后, ATP 含量回復(fù)至對(duì)照組水平;19℃脅迫 6 h 也會(huì)引起 ATP 含量上升,為對(duì)照組的 1. 40倍,但是隨著溫度的回復(fù),ATP 含量也下降,回復(fù)至對(duì)照溫度 24 h 后,ATP 含量?jī)H為對(duì)照組的 60%(P < 0.05);無論是脅迫過程中或者溫度回復(fù)后,31℃的高溫均未引起 ATP 含量的顯著變化;35℃脅迫后 6 h,ATP 含量顯著增加,達(dá)到對(duì)照組的 1.69 倍(P < 0.05),而溫度回復(fù)至對(duì)照水平 24 h 后,ATP 含量也回復(fù)至對(duì)照組水平。
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]鹽藻絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆、原核表達(dá)及純化[J]. 陶曉迎,柴曉杰,薛飛,李秀娟,叢玉婷. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2014(02)
[2]重組斑馬魚CD36蛋白的原核表達(dá)及純化[J]. 魏書磊,劉振輝,黃巧艷. 生物技術(shù)通訊. 2013(03)
[3]紅笛鯛tdt基因融合蛋白原核表達(dá)條件的優(yōu)化及純化[J]. 黃瑜,張雪利,魯義善,簡(jiǎn)紀(jì)常,吳灶和,黃浦江,周澤軍. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(01)
[4]家蠶中腸cDNA T7噬菌體展示文庫的構(gòu)建和免疫相關(guān)基因的淘選[J]. 胡翠美,王菲,宋亮,夏慶友. 蠶業(yè)科學(xué). 2011(04)
[5]溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼體生長(zhǎng)、變態(tài)和存活率的影響[J]. 楊章武,盧小寧,鄭雅友,李正良. 臺(tái)灣海峽. 2011(01)
[6]利用噬菌體展示技術(shù)研究功能基因組和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用——與酵母雙雜交方法比較[J]. 張佳娣,石屹峰. 中國醫(yī)藥生物技術(shù). 2010(03)
[7]寒流對(duì)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖的影響及防范措施探討[J]. 李色東,何建國,張存善,劉麗燕,王亞平. 科學(xué)養(yǎng)魚. 2010(01)
[8]噬菌體展示技術(shù)在蛋白質(zhì)研究中的應(yīng)用[J]. 李珣,任珍珍,鐘國華. 生命的化學(xué). 2009(04)
[9]溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦血淋巴免疫指標(biāo)的影響[J]. 李強(qiáng),李華,姜傳俊,王吉橋. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(02)
[10]氨氮脅迫前后凡納濱對(duì)蝦組織中抗氧化酶和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的分布[J]. 劉曉華,曹俊明,楊大偉,周萌,趙紅霞,馬力,藍(lán)漢冰,謝從新,黃志剛. 水利漁業(yè). 2007(06)
碩士論文
[1]環(huán)境溫度對(duì)大蟾蜍中華亞種非特異性免疫、抗氧化功能及能量消耗特征的影響[D]. 莊建洲.浙江師范大學(xué) 2013
本文編號(hào):3475313
【文章來源】:集美大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】:79 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
凡納濱對(duì)蝦外部特征圖
圖 2-1 不同溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺 O2-.含量(a),SOD 活力(b),CAT 活力(c)和 GSH 含量(d)變化的影響(n=3)“*”表示實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)與對(duì)照組數(shù)據(jù)具有顯著性差異(P < 0.05),下同2.2.2 溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺 NOS 活力及 NO 含量的影響溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織中 NOS 活力的影響如圖 2-2(a)所示。15℃脅迫 6h, NOS 活力與對(duì)照組無顯著差異,但是水溫回復(fù)至對(duì)照水平 24 h 后,NOS 活力增加,達(dá)到對(duì)照組的 1.60 倍(P < 0.05);19℃脅迫后 6 h,NOS 活力降低,僅為對(duì)照組的 57%,但是隨著溫度恢復(fù) NOS 活力也恢復(fù);31℃高溫脅迫引起 NOS 活力下降,脅迫 6 h 后其活力為對(duì)照組的 76%,但是隨著溫度恢復(fù),NOS 活力顯著上升,24 h 時(shí)達(dá)到對(duì)照組的 1.74倍(P < 0.05);35℃脅迫導(dǎo)致 NOS 活力在 6 h 時(shí)增加,為對(duì)照組的 1.22 倍,并且在溫度恢復(fù) 24 h 后,NOS 活力為對(duì)照組的 2.59 倍(P < 0.05)。溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織中 NO 含量的影響如圖 2-2(b)所示,15 與 19℃低溫脅迫 6 h 時(shí),實(shí)驗(yàn)組 NO 含量與對(duì)照組相比無顯著差異,當(dāng)回復(fù)至對(duì)照溫度 24 h 后,19℃脅迫實(shí)驗(yàn)組 NO 含量顯著降低,僅為對(duì)照組的 20%(P < 0.05);31 和 35℃脅迫 6 h
圖 2-2 不同溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺 NOS(a)活力和 NO(b)生成量的影響(n=3)2.2.3 溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺 ATP 含量的影響溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織中 ATP 含量的影響如圖 2-3 所示,15℃脅迫 6 h 后ATP 含量顯著高于對(duì)照組,為對(duì)照組的 1.57 倍(P < 0.05),但是溫度回復(fù)至對(duì)照水平 24 h后, ATP 含量回復(fù)至對(duì)照組水平;19℃脅迫 6 h 也會(huì)引起 ATP 含量上升,為對(duì)照組的 1. 40倍,但是隨著溫度的回復(fù),ATP 含量也下降,回復(fù)至對(duì)照溫度 24 h 后,ATP 含量?jī)H為對(duì)照組的 60%(P < 0.05);無論是脅迫過程中或者溫度回復(fù)后,31℃的高溫均未引起 ATP 含量的顯著變化;35℃脅迫后 6 h,ATP 含量顯著增加,達(dá)到對(duì)照組的 1.69 倍(P < 0.05),而溫度回復(fù)至對(duì)照水平 24 h 后,ATP 含量也回復(fù)至對(duì)照組水平。
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]鹽藻絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆、原核表達(dá)及純化[J]. 陶曉迎,柴曉杰,薛飛,李秀娟,叢玉婷. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2014(02)
[2]重組斑馬魚CD36蛋白的原核表達(dá)及純化[J]. 魏書磊,劉振輝,黃巧艷. 生物技術(shù)通訊. 2013(03)
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[4]家蠶中腸cDNA T7噬菌體展示文庫的構(gòu)建和免疫相關(guān)基因的淘選[J]. 胡翠美,王菲,宋亮,夏慶友. 蠶業(yè)科學(xué). 2011(04)
[5]溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼體生長(zhǎng)、變態(tài)和存活率的影響[J]. 楊章武,盧小寧,鄭雅友,李正良. 臺(tái)灣海峽. 2011(01)
[6]利用噬菌體展示技術(shù)研究功能基因組和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用——與酵母雙雜交方法比較[J]. 張佳娣,石屹峰. 中國醫(yī)藥生物技術(shù). 2010(03)
[7]寒流對(duì)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖的影響及防范措施探討[J]. 李色東,何建國,張存善,劉麗燕,王亞平. 科學(xué)養(yǎng)魚. 2010(01)
[8]噬菌體展示技術(shù)在蛋白質(zhì)研究中的應(yīng)用[J]. 李珣,任珍珍,鐘國華. 生命的化學(xué). 2009(04)
[9]溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦血淋巴免疫指標(biāo)的影響[J]. 李強(qiáng),李華,姜傳俊,王吉橋. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(02)
[10]氨氮脅迫前后凡納濱對(duì)蝦組織中抗氧化酶和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的分布[J]. 劉曉華,曹俊明,楊大偉,周萌,趙紅霞,馬力,藍(lán)漢冰,謝從新,黃志剛. 水利漁業(yè). 2007(06)
碩士論文
[1]環(huán)境溫度對(duì)大蟾蜍中華亞種非特異性免疫、抗氧化功能及能量消耗特征的影響[D]. 莊建洲.浙江師范大學(xué) 2013
本文編號(hào):3475313
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