隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)的快速發(fā)展,由水產(chǎn)病原菌引發(fā)的病害問題日益嚴(yán)重,給水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)帶來了難以估量的經(jīng)濟(jì)損失。燦爛弧菌（Vibrio splendidus）作為一種條件致病性的細(xì)菌分布在鹽湖和海洋環(huán)境中,宿主范圍廣泛,可以感染雙殼貝類、刺參、魚類等多種海水養(yǎng)殖的動(dòng)物,并使其成批死亡。目前檢測(cè)燦爛弧菌的方法主要有建立在蛋白質(zhì)水平上的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)（ELISA、Dot-ELISA、免疫層析法、免疫熒光抗體技術(shù)、間接熒光抗體檢測(cè)法等）和建立在基因水平上的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)（核酸探針檢測(cè)技術(shù)、PCR法、LAMP技術(shù)等）。然而,這些技術(shù)存在著成本高、耗時(shí)長(zhǎng)、依賴專業(yè)人員和檢測(cè)設(shè)備、易產(chǎn)生假陽性等一系列的缺點(diǎn)。因此,當(dāng)務(wù)之急需要建立一種快速、簡(jiǎn)便、高效、安全的燦爛弧菌檢測(cè)新技術(shù)。本研究綜合運(yùn)用核酸外切酶Ⅲ（ExonucleaseⅢ,ExoⅢ）進(jìn)行循環(huán)酶切反應(yīng)和納米金標(biāo)記DNA探針檢測(cè)技術(shù),建立一種靈敏高效的核酸試紙條檢測(cè)法,實(shí)現(xiàn)對(duì)燦爛弧菌的可視化快速檢測(cè)。利用循環(huán)酶切反應(yīng)放大檢測(cè)信號(hào),并通過金標(biāo)核酸探針利用納米金聚集的顯色原理實(shí)現(xiàn)可視化檢測(cè)。讓DNA探針Probe 1和AuNPs結(jié)合形成復(fù)合物,用于制備... 

【文章來源】：魯東大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

012-2018年全國(guó)水產(chǎn)品損失量

魯東大學(xué)碩士學(xué)位論文1第1章緒論1.1水產(chǎn)病害簡(jiǎn)介我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)近年來發(fā)展迅速，然而由于集約化養(yǎng)殖與工廠化模式的大規(guī)模建立，使養(yǎng)殖病害問題也隨之而來[1-2]。如果病害不能進(jìn)行有效防治，水產(chǎn)養(yǎng)殖戶們將會(huì)承受難以想象的經(jīng)濟(jì)損失。水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)中的病害問題已經(jīng)變成影響整個(gè)行業(yè)可持續(xù)蓬勃發(fā)展的重要阻礙[3-4]。水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物，如鮑魚、海參、對(duì)蝦、大鯢等品種的病害發(fā)生，會(huì)造成很多養(yǎng)殖地區(qū)發(fā)生大面積的減產(chǎn)甚至絕產(chǎn)，每年導(dǎo)致數(shù)十億元乃至數(shù)百億的經(jīng)濟(jì)損失[5-9]。我國(guó)每年水產(chǎn)品總產(chǎn)量已超過5000萬噸，但由于漁業(yè)災(zāi)情造成的直接經(jīng)濟(jì)損失超過150億元，2012-2018年全國(guó)水產(chǎn)品養(yǎng)殖面積與水產(chǎn)品總產(chǎn)量如圖1.1所示，水產(chǎn)品損失產(chǎn)量與直接經(jīng)濟(jì)損失如圖1.2所示。圖1.12012-2018年全國(guó)水產(chǎn)品的總產(chǎn)量與養(yǎng)殖面積Figure1.1AquacultureareaandtotaloutputofaquaticproductsinChinafrom2012-2018圖1.22012-2018年全國(guó)水產(chǎn)品損失量Figure1.2LossofaquaticproductsinChinafrom2012-2018

的結(jié)合，然后利用標(biāo)記在抗原或者抗體上的納米金進(jìn)行顯色，最終出現(xiàn)肉眼可見的紅色條帶，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本的檢測(cè)[96]。試紙條的檢測(cè)方法非常簡(jiǎn)單：把待檢測(cè)的樣品滴至樣品墊，若待檢測(cè)樣品中存在目標(biāo)物，目標(biāo)物便會(huì)被連接至標(biāo)記粒子上，然后與對(duì)目標(biāo)物有特異性的生物受體相結(jié)合，接著在毛細(xì)作用下穿過反應(yīng)膜，通過測(cè)試線時(shí)與復(fù)合物結(jié)合的目標(biāo)物能夠跟檢測(cè)線上的另一受體結(jié)合而顯色，然后與質(zhì)控線上的受體特異結(jié)合而顯色，證明試紙條有效，結(jié)果為陽性；若待檢測(cè)樣品中不存在目標(biāo)物，便只有質(zhì)控線可以顯色，結(jié)果為陰性[97]。圖1.3試紙條的結(jié)構(gòu)圖Figure1.3Structureofteststrip1.5.3試紙條的優(yōu)點(diǎn)試紙條檢測(cè)法靈敏度很高，特異性很強(qiáng)，出現(xiàn)假陽性結(jié)果的可能性比較低；檢測(cè)步驟簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間快，僅需30min，而且不需要借助任何的儀器，也無需專業(yè)人員，肉眼便可觀察檢測(cè)結(jié)果；攜帶方便，可以在任何時(shí)間和任何地點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，真正實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)結(jié)果可以長(zhǎng)期的保存；每個(gè)試紙條所用試劑量很少，制作過程不需要昂貴的儀器，成本低廉，是一種既經(jīng)濟(jì)又簡(jiǎn)便的可以進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)篩查的檢測(cè)方法[98]。

【參考文獻(xiàn)】：
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