我國是水產(chǎn)養(yǎng)殖大國,在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)蓬勃發(fā)展的同時(shí),水生動(dòng)物病害給水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)蒙上陰影。近年來魚類諾卡氏菌病已經(jīng)成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的嚴(yán)重病害,當(dāng)水產(chǎn)動(dòng)物體質(zhì)虛弱、免疫力低下時(shí),病原菌可通過鰓、飼料或者傷口等進(jìn)行感染。病魚表現(xiàn)為腹部膨大,內(nèi)臟器官常彌漫性分布有致密肉芽腫,該病的感染率和死亡率都比較高,目前尚缺乏有效的防治措施,給水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)帶來巨大損失。近年來鰤魚諾卡氏菌（Nocardia seriolae）已成為魚類諾卡氏菌病的主要病原,約39種海淡水養(yǎng)殖魚種深受其害,然而關(guān)于鰤魚諾卡氏菌的致病機(jī)理及其毒力因子目前尚不明確。通過對鰤魚諾卡氏菌ZJ0503全基因組進(jìn)行分析,預(yù)測ORF6296編碼一種谷氨酰內(nèi)肽酶（Glutamyl endopeptidase）同源類似物,命名該蛋白為Glu NS。生物信息學(xué)分析Glu NS是鰤魚諾卡氏菌的潛在分泌型毒力因子。本研究克隆了Glu NS基因,并對其功能進(jìn)行分析;對鰤魚諾卡氏菌胞外產(chǎn)物進(jìn)行了質(zhì)譜鑒定;構(gòu)建了Glu NS基因的亞細(xì)胞定位和過表達(dá)重組質(zhì)粒,研究Glu NS在魚類細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位和致病功能;利用同源重組構(gòu)建Glu NS基因缺失株和回補(bǔ)株,探... 

【文章來源】：廣東海洋大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

鰤魚諾卡氏菌GluNS核酸序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列

靶向定位于魚類細(xì)胞線粒體的鰤魚諾卡氏菌谷氨酰內(nèi)肽酶的功能研究12AGluNSStreptomyces組合BGluNSN.concava組合圖2-2GluNS蛋白的三維結(jié)構(gòu)預(yù)測分析A：RMS=0.954(850-850原子)；B：RMS=9.036(1219-1219原子)Fig.2-2Predictionofthethree-dimensionalstructureofGluNSproteinA：RMS=0.954(850to850atoms)；B：RMS=9.036(1219to1219atoms)通過GenBank進(jìn)行同源搜索，用親緣關(guān)系比較近的9種放線菌目細(xì)菌的GluNS同源類似物進(jìn)行序列比對（圖2-3）。結(jié)果顯示，100%相似的氨基酸位點(diǎn)比較少（7%），相似度>60%的氨基酸序列占39.2%，表明谷氨酰內(nèi)肽酶在進(jìn)化上缺乏十分保守的氨基酸。GluNS的推定氨基酸序列與N.concava、N.salmonicida、N.asteroides、Rhodococcuskunmingensis、R.opacus、Mycobacteriumabscessus、Streptomycescoelicolor和M.tuberculosis的同源性分別為93、67、66、49、48、40、32和26%。利用鰤魚諾卡氏菌GluNS氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，如圖2-4所示谷氨酰內(nèi)肽酶在革蘭氏陽性菌和病毒均有報(bào)道。鰤魚諾卡氏菌的GluNS先和諾卡氏菌屬的細(xì)菌聚為一枝，然后與鏈霉菌屬、分枝桿菌屬、產(chǎn)酶溶桿菌屬的革蘭氏陽性菌相聚。有趣的是，接著會(huì)傾向于先和來源于病毒（甲肝病毒、人星狀病毒、田菁屬花葉病毒、豬傳染性胃腸炎冠狀病毒）的同源類似物相聚，而葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬、腸球菌屬的革蘭氏陽性菌則在另外聚為一個(gè)分枝，表明鰤魚諾卡氏菌谷氨酰內(nèi)肽酶GluNS與鏈霉菌屬親緣關(guān)系較葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬高。細(xì)菌的谷氨酰內(nèi)肽酶可以分成三種：葡萄球菌組、芽孢桿菌組和鏈霉菌組，GluNS應(yīng)該是鏈霉菌組谷氨酰內(nèi)肽酶。

靶向定位于魚類細(xì)胞線粒體的鰤魚諾卡氏菌谷氨酰內(nèi)肽酶的功能研究12AGluNSStreptomyces組合BGluNSN.concava組合圖2-2GluNS蛋白的三維結(jié)構(gòu)預(yù)測分析A：RMS=0.954(850-850原子)；B：RMS=9.036(1219-1219原子)Fig.2-2Predictionofthethree-dimensionalstructureofGluNSproteinA：RMS=0.954(850to850atoms)；B：RMS=9.036(1219to1219atoms)通過GenBank進(jìn)行同源搜索，用親緣關(guān)系比較近的9種放線菌目細(xì)菌的GluNS同源類似物進(jìn)行序列比對（圖2-3）。結(jié)果顯示，100%相似的氨基酸位點(diǎn)比較少（7%），相似度>60%的氨基酸序列占39.2%，表明谷氨酰內(nèi)肽酶在進(jìn)化上缺乏十分保守的氨基酸。GluNS的推定氨基酸序列與N.concava、N.salmonicida、N.asteroides、Rhodococcuskunmingensis、R.opacus、Mycobacteriumabscessus、Streptomycescoelicolor和M.tuberculosis的同源性分別為93、67、66、49、48、40、32和26%。利用鰤魚諾卡氏菌GluNS氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，如圖2-4所示谷氨酰內(nèi)肽酶在革蘭氏陽性菌和病毒均有報(bào)道。鰤魚諾卡氏菌的GluNS先和諾卡氏菌屬的細(xì)菌聚為一枝，然后與鏈霉菌屬、分枝桿菌屬、產(chǎn)酶溶桿菌屬的革蘭氏陽性菌相聚。有趣的是，接著會(huì)傾向于先和來源于病毒（甲肝病毒、人星狀病毒、田菁屬花葉病毒、豬傳染性胃腸炎冠狀病毒）的同源類似物相聚，而葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬、腸球菌屬的革蘭氏陽性菌則在另外聚為一個(gè)分枝，表明鰤魚諾卡氏菌谷氨酰內(nèi)肽酶GluNS與鏈霉菌屬親緣關(guān)系較葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬高。細(xì)菌的谷氨酰內(nèi)肽酶可以分成三種：葡萄球菌組、芽孢桿菌組和鏈霉菌組，GluNS應(yīng)該是鏈霉菌組谷氨酰內(nèi)肽酶。


本文編號(hào)：3363127