遲緩愛德華氏菌（Edwardsiella tarda,E.tarda）是重要的革蘭氏陰性致病菌,其宿主范圍極廣,可以感染魚類、兩棲類、爬行類、哺乳動物以及人類,最常見的宿主是魚類。E.tarcda既能感染咸水魚也能感染淡水魚,是水產(chǎn)養(yǎng)殖中常見病原菌,它能使魚類患愛德華氏菌�。‥dwardsiellosis）,每年都會給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。目前對于愛德華氏菌病的防治以化學(xué)防治法為主,雖然有多個課題組致力于愛德華氏菌病疫苗的研究,但目前都沒有商業(yè)化的疫苗可用。Ⅲ型分泌系統(tǒng)（Type Ⅲ Secretion System,T3SS）廣泛存在于動植物革蘭氏陰性病原菌中,病原菌利用T3SS將毒力蛋白（effectors,效應(yīng)蛋白）“注射”到宿主細胞的細胞質(zhì)內(nèi),干擾宿主的正常生理活動。T3SS是E.tarda重要的致病因子,E.tarda利用T3SS將效應(yīng)蛋白輸送到魚體細胞內(nèi),使魚類患敗血病死亡。T3SS的針狀結(jié)構(gòu)由超過100個needle蛋白構(gòu)成。研究表明,T3SS的針狀結(jié)構(gòu)是由needle蛋白的C端通過疏水相互作用有規(guī)律地聚集組裝而成。EsaG是組裝遲緩愛德華氏菌T3SS針狀結(jié)構(gòu)的基... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 遲緩愛德華氏菌
    1.3 Ⅲ型分泌系統(tǒng)概述
    1.4 Ⅲ型分泌系統(tǒng)的分子伴侶
    1.5 Ⅲ型分泌系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)研究進展
        1.5.1 Ⅲ型分泌系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)概述
        1.5.2 Needle和Needle蛋白
        1.5.3 Needle蛋白與其分子伴侶復(fù)合物
    1.6 蛋白質(zhì)相互作用的檢測
        1.6.1 酵母雙雜交
        1.6.2 GST pull down
    1.7 結(jié)構(gòu)生物學(xué)
        1.7.1 結(jié)構(gòu)生物學(xué)概述
        1.7.2 蛋白質(zhì)結(jié)晶
        1.7.3 晶體數(shù)據(jù)收集
        1.7.4 晶體結(jié)構(gòu)解析
    1.8 本研究的背景、目的與意義
2 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 生物信息學(xué)分析
    2.3 酵母雙雜交
    2.4 表達載體構(gòu)建
    2.5 蛋白表達與純化
        2.5.1 蛋白表達與親和純化
        2.5.2 Orf13/EsaH復(fù)合物表達與純化
        2.5.3 硒代蛋白的表達與純化
        2.5.4 EsaG~(33-73)/Orf13/EsaH復(fù)合物表達與純化
    2.6 聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.6.1 SDS-PAGE
        2.6.2 Tricine-SDS-PAGE
    2.7 結(jié)晶條件篩選與晶體優(yōu)化
        2.7.1 結(jié)晶條件的初篩
        2.7.2 晶體的優(yōu)化
    2.8 數(shù)據(jù)收集與結(jié)構(gòu)解析
        2.8.1 衍射數(shù)據(jù)收集
        2.8.2 數(shù)據(jù)處理
        2.8.3 結(jié)構(gòu)解析
3 實驗結(jié)果
    3.1 生物信息學(xué)分析
        3.1.1 結(jié)構(gòu)域分析
        3.1.2 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
    3.2 酵母雙雜交
    3.3 蛋白表達純化
        3.3.1 融合蛋白表達純化
        3.3.2 Orf13/EsaH表達純化
        3.3.3 EsaG/Orf13/EsaH復(fù)合物表達純化
    3.4 結(jié)晶條件篩選與晶體優(yōu)化
        3.4.1 Orf13/EsaH復(fù)合物結(jié)晶條件篩選與晶體優(yōu)化
        3.4.2 EsaG/Orf13/EsaH復(fù)合物結(jié)晶條件篩選與晶體優(yōu)化
    3.5 衍射數(shù)據(jù)收集與處理
    3.6 晶體結(jié)構(gòu)解析與修正
        3.6.1 晶胞內(nèi)容分析
        3.6.2 晶體結(jié)構(gòu)解析
    3.7 Orf13/EsaH復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)
    3.8 EsaG/Orf13/EsaH復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)
4 討論
    4.1 酵母雙雜交實驗結(jié)果討論
    4.2 EsaH的生物學(xué)功能
    4.3 EsaG~(33-54)是否在晶體中
    4.4 潛在的藥物設(shè)計價值
    4.5 研究展望
參考文獻
附錄Ⅰ 溶液配制
附錄Ⅱ 分子克隆反應(yīng)體系
附錄Ⅲ 數(shù)據(jù)收集與結(jié)構(gòu)修正統(tǒng)計信息
致謝



本文編號：3185161