本研究運(yùn)用培養(yǎng)計(jì)數(shù)法、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)法和16S rRNA基因的PCR-DGGE指紋圖譜分析等技術(shù)，進(jìn)行了刺參養(yǎng)殖環(huán)境的細(xì)菌群落種類組成季節(jié)變化研究及DGGEMarker的制備；并分析了刺參發(fā)病前后養(yǎng)殖環(huán)境中幾個(gè)主要細(xì)菌類群（總異養(yǎng)菌、弧菌、硝化細(xì)菌、硫化細(xì)菌、硝酸鹽還原菌、硫酸鹽還原菌）的變化及其與理化因子關(guān)系，同時(shí)通過(guò)模擬試驗(yàn)，研究了發(fā)病刺參池塘環(huán)境沉積物中不同生理類群細(xì)菌數(shù)量及群落結(jié)構(gòu)對(duì)底質(zhì)改良劑的響應(yīng)。主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果如下：1.刺參養(yǎng)殖環(huán)境細(xì)菌群落種類組成季節(jié)變化研究及DGGE Marker的制備。取多池塘不同季節(jié)沉積物樣品，分別提取DNA，以細(xì)菌16S rRNA基因通用引物8F和1492R為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過(guò)克隆、限制性內(nèi)切酶酶切、測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示不同季節(jié)的細(xì)菌群落種類組成有所不同，其中變形菌門，浮霉菌門，擬桿菌門和綠彎菌門細(xì)菌數(shù)量較大。除了不可培養(yǎng)細(xì)菌外，變形菌門細(xì)菌在除了春季以外的其他三個(gè)季節(jié)均為優(yōu)勢(shì)菌群，其中，夏季所占比例約為32%，秋季所占比例約為29%，冬季變所占比例約為42%.擬桿菌門細(xì)菌秋季所占比例約為21%，而在春季浮霉菌門細(xì)菌為優(yōu)勢(shì)菌群，所占比例... 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 微生物生態(tài)學(xué)概況
    1.2 微生物基因組學(xué)研究進(jìn)展
    1.3 微生物的多樣性
    1.4 微生物多樣性研究方法
        1.4.1 傳統(tǒng)研究方法
        1.4.2 現(xiàn)代分子生物學(xué)研究方法
    1.5 刺參養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及其問(wèn)題
        1.5.1 刺參養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀
        1.5.2 刺參養(yǎng)殖業(yè)目前所面臨的問(wèn)題
        1.5.3 刺參養(yǎng)殖過(guò)程中疾病及微生物的研究
        1.5.4 刺參疾病的治療方法
    1.6 本論文的研究目的、意義和內(nèi)容
        1.6.1 研究目的和意義
        1.6.2 研究?jī)?nèi)容
        1.6.3 技術(shù)路線
2 刺參養(yǎng)殖環(huán)境細(xì)菌群落種類組成季節(jié)變化研究及 DGGE MARKER 的制備
    2.1 材料與方法
        2.1.1 樣品和材料來(lái)源
        2.1.2 沉積物中細(xì)菌基因組 DNA 的提取與純化
        2.1.3 16S rDNA 的擴(kuò)增
        2.1.4 克隆，RFLP 和測(cè)序
        2.1.5 DGGE 的條件優(yōu)化
        2.1.6 DGGE
        2.1.7 DGGE marker 的制備
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 沉積物樣品中細(xì)菌基因組 DNA 的提取
        2.2.2 16S rRNA 的擴(kuò)增
        2.2.3 克隆
        2.2.4 RFLP
        2.2.5 刺參養(yǎng)殖池環(huán)境細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)特征
        2.2.6 DGGE marker 的制備
    2.3 討論
3 刺參發(fā)病前后養(yǎng)殖環(huán)境幾類細(xì)菌數(shù)量的變化及其與理化因子關(guān)系
    3.1 材料和方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料來(lái)源
        3.1.2 培養(yǎng)計(jì)數(shù)
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 刺參池塘理化指標(biāo)的變化
        3.2.2 刺參池塘養(yǎng)殖環(huán)境中幾種重要生理類群細(xì)菌的數(shù)量變化
    3.3 討論
4 刺參養(yǎng)殖池環(huán)境細(xì)菌群落對(duì)底質(zhì)改良劑的響應(yīng)模擬試驗(yàn)
    4.1 材料和方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料來(lái)源
        4.1.2 試驗(yàn)方法
        4.1.3 培養(yǎng)計(jì)數(shù)
        4.1.4 DNA 的提取
        4.1.5 16S rRNAV3 區(qū)擴(kuò)增
        4.1.6 DGGE、克隆、測(cè)序、序列分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 底泥中不同生理類群細(xì)菌的數(shù)量變化
        4.2.2 DNA 的提取、擴(kuò)增與純化
        4.2.3 底泥 DGGE 圖譜結(jié)果
        4.2.4 多樣性指數(shù)
        4.2.5 聚類分析
        4.2.6 相似性分析
        4.2.7 優(yōu)勢(shì)細(xì)菌 16S rRNA 基因鑒定
    4.3 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]復(fù)方中草藥對(duì)刺參免疫的影響[J]. 王東梅,王維新.  飼料研究. 2012(11)
[2]養(yǎng)參池底泥弧菌數(shù)量變動(dòng)及微生態(tài)制劑對(duì)其影響[J]. 陳文博,王洪軍,李勃,宋曉陽(yáng),劉彤,郝佳,許巖,馬琳,金文鑫.  水產(chǎn)養(yǎng)殖. 2012(10)
[3]仿刺參“腐皮綜合癥”病灶處優(yōu)勢(shì)菌的分離鑒定及AHLs信號(hào)分子的檢測(cè)[J]. 張瑩,姜國(guó)良,劉云,吳志強(qiáng),馬海燕,蘇明霞.  微生物學(xué)通報(bào). 2009(11)
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[6]黃海北部不同站位海洋細(xì)菌群落分布特征[J]. 白潔,李海艷,趙陽(yáng)國(guó).  微生物學(xué)報(bào). 2009(03)
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[10]養(yǎng)殖刺參潰瘍病病原菌RH2的鑒定及其生物學(xué)特性分析[J]. 楊嘉龍,周麗,繩秀珍,邢婧,戰(zhàn)文斌.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2007(04)

碩士論文
[1]象山港養(yǎng)殖區(qū)生境修復(fù)的沉積環(huán)境細(xì)菌群落與環(huán)境影響因子的研究[D]. 有小娟.中國(guó)海洋大學(xué) 2013
[2]枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）對(duì)刺參腐皮綜合病致病菌的拮抗作用以及對(duì)水質(zhì)的影響[D]. 伏傳永.中國(guó)海洋大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3185064