日本沼蝦隸屬十足目、長臂蝦科、沼蝦屬，自然分布于中國、日本、越南及俄羅斯遠東地區(qū)，在我國各地淡水水域中都有分布。日本沼蝦的養(yǎng)殖始于二十世紀五十年代，從2004年起，我國日本沼蝦的年養(yǎng)殖產量就超過了20萬噸。多年來，日本沼蝦在市場上一直供不應求，暢銷不衰，是一種養(yǎng)殖效益非�？捎^的淡水蝦類。但長期以來，繁殖日本沼蝦用的親本多為野生個體，未經過系統(tǒng)選育，日本沼蝦的養(yǎng)殖單產較低，且多是套養(yǎng)在各種魚類的養(yǎng)殖池塘中，主養(yǎng)日本沼蝦的池塘較少。因此開展日本沼蝦的種質資源保護、良種選育工作是當前日本沼蝦養(yǎng)殖業(yè)中亟待解決的問題。由于當前已知的日本沼蝦微衛(wèi)星標記只有二十多個，這嚴重地限制了日本沼蝦的群體遺傳結構分析、種質資源評價等工作；此外，日本沼蝦雄性生長速度顯著大于雌性，開展單性苗種培育意義重大，但當前沒有鑒別日本沼蝦遺傳性別的分子標記，使得單性苗種培育工作一直無法得以開展。本論文的研究內容主要包含如下3個方面：1.日本沼蝦多態(tài)性微衛(wèi)星標記的開發(fā)：（1）FIASCO法開發(fā)微衛(wèi)星標記。通過生物素標記的探針（GT）13和（GA）13富集微衛(wèi)星序列，共獲得含微衛(wèi)星的序列334個，成功設計引物110對，設計引物... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
1、引言
    1.1 分子標記技術簡介
        1.1.1 RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism）標記
        1.1.2 RAPD（random amplified polymorphic DNA）技術
        1.1.3 AFLP（amplified fragment length polymorphism）標記
        1.1.4 SSR（simple sequence repeats）標記
        1.1.5 SNP（Single Nucleotide Polymorphisms）標記
    1.2 微衛(wèi)星位點分離方法
        1.2.1 傳統(tǒng)方法
        1.2.2 微衛(wèi)星富集法
        1.2.3 FIASCO 法
        1.2.4 數(shù)據(jù)查找法
        1.2.5 近緣物種篩選法
    1.3 分子標記技術在蝦類遺傳多樣性研究中的應用
        1.3.1 分子標記在野生蝦類遺傳多樣性中的應用
        1.3.2 分子標記在養(yǎng)殖與野生蝦類間的遺傳多樣性研究中的應用
    1.4 蝦蟹類的性別決定及性別相關分子標記的研究
    1.5 日本沼蝦研究現(xiàn)狀
        1.5.1 日本沼蝦分子標記開發(fā)及遺傳多樣性分析研究現(xiàn)狀
        1.5.2 日本沼蝦性別相關基因及分子標記研究現(xiàn)狀
    1.6 本研究的目的、意義
2、材料與方法
    2.1 試驗用日本沼蝦
    2.2 試劑和儀器
    2.3 基因組 DNA 提取
    2.4 微衛(wèi)星基因組富集文庫構建
        2.4.1 基因組 DNA 酶切
        2.4.2 接頭的制備
        2.4.3 連接
        2.4.4 預擴增
        2.4.5 生物素探針雜交
        2.4.6 磁珠富集
        2.4.7 PCR 擴增
        2.4.8 克隆、測序
    2.5 ISSR-PCR 法開發(fā)微衛(wèi)星標記
    2.6 序列分析及微衛(wèi)星引物設計
    2.7 PAGE
    2.8 熒光標記 SSR
    2.9 AFLP
        2.9.1 基因組 DNA 提取
        2.9.2 限制性酶切及連接
        2.9.3 預擴增
        2.9.4 選擇性擴增
    2.10 數(shù)據(jù)分析
3、結果
    3.1 FIASCO 法開發(fā)多態(tài)性微衛(wèi)星標記
        3.1.1 FIASCO 文庫構建結果
        3.1.2 測序統(tǒng)計及引物設計
        3.1.3 微衛(wèi)星標記多態(tài)性分析
    3.2 ISSR-PCR 法開發(fā)微衛(wèi)星標記結果
        3.2.1 ISSR-PCR 法預擴增結果
        3.2.2 克隆后菌液檢測結果
        3.2.3 測序統(tǒng)計及引物設計結果
        3.2.4 微衛(wèi)星標記多態(tài)性分析
    3.3 開發(fā)的微衛(wèi)星序列特征分析
    3.4 4 個日本沼蝦群體遺傳結構分析
        3.4.1 4 個日本沼蝦群體熒光 SSR 基因分型結果
        3.4.2 4 個日本沼蝦群體的遺傳多樣性
        3.4.3 群體遺傳分化和遺傳距離
        3.4.4 4 個日本沼蝦群體遺傳分化
    3.5 日本沼蝦性別相關分子標記篩選
        3.5.1 基因組 DNA 的提取
        3.5.2 性別相關 SSR 標記的篩選
        3.5.3 基因組 DNA 酶切、預擴增
        3.5.4 選擇性擴增和性別相關 AFLP 分子標記的篩選
4、討論
    4.1 微衛(wèi)星標記的開發(fā)
        4.1.1 微衛(wèi)星位點的分離方法
        4.1.2 微衛(wèi)星標記效用的評價
        4.1.3 I型微衛(wèi)星標記的分離
    4.2 微衛(wèi)星二核苷酸的重復類型
    4.3 群體遺傳結構分析
    4.4 性別相關分子標記
5.結論
6.主要參考文獻
7. 致謝
8. 讀博期間發(fā)表文章情況


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3185258