卡拉膠（Carrageenan）是一種親水性的多糖物質(zhì),從某些海藻細(xì)胞壁提取的、由β-1,3-D-半乳糖和α-1,4-D-半乳糖為基本骨架,交替連接所形成的線性硫酸多糖,主要分為三類：λ-（Lamda）型、ι-（Iota）型和κ-（Kappa）型�？ɡz的降解產(chǎn)物寡糖具有廣泛的生物活性,如免疫調(diào)節(jié)、抗凝血、抗腫瘤、抗病毒等作用�？ɡz降解酶是一種多糖水解酶,通過作用于卡拉膠的p-1,4糖苷鍵來水解卡拉膠,其水解產(chǎn)物主要為偶數(shù)卡拉膠寡糖。目前已報道的卡拉膠酶都?xì)w屬于糖水解酶家族。對不同類型的卡拉膠酶結(jié)構(gòu)及其功能、底物專一性等研究,具有重要的理論意義和實踐價值。另外,利用卡拉膠酶也可以對卡拉膠硫酸基團(tuán)的結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系進(jìn)行研究,對卡拉寡糖工業(yè)化應(yīng)用、細(xì)菌卡拉膠代謝研究等方面也具有重要意義。而且酶解法制備卡拉膠寡糖的底物專一、條件溫和,能解決傳統(tǒng)化學(xué)和物理降解法不易控制、產(chǎn)物分布不均勻的缺點,從而為進(jìn)一步研究卡拉膠寡糖的生物活性提供幫助。本論文從漳州市東山島海域海水、養(yǎng)殖海水及紅藻藻體上分離得到8株具有卡拉膠及瓊膠降解功能的菌株,其中一株編號KL-A經(jīng)平板劃線,根據(jù)平板上水解圈的大小及發(fā)... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
Contents
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 海洋多糖及多糖水解酶
    1.2 卡拉膠結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及應(yīng)用
        1.2.1 卡拉膠的結(jié)構(gòu)組成與分類
        1.2.2 卡拉膠的理化性質(zhì)
        1.2.3 卡拉膠的應(yīng)用
    1.3 卡拉膠寡糖
        1.3.1 卡拉膠寡糖的制備方法
        1.3.2 卡拉膠寡糖的分離純化與寡糖結(jié)構(gòu)的鑒定方法
        1.3.3 卡拉膠寡糖的生物活性
    1.4 卡拉膠酶
        1.4.1 卡拉膠降解酶的研究進(jìn)展
        1.4.2 卡拉膠酶的應(yīng)用
        1.4.3 卡拉膠降解酶的應(yīng)用前景展望
    1.5 菌株發(fā)酵產(chǎn)酶的優(yōu)化方法
        1.5.1 非統(tǒng)計學(xué)方法
        1.5.2 統(tǒng)計學(xué)方法
    1.6 本論文的研究思路、目的與意義
第二章 ι-卡拉膠降解細(xì)菌的篩選鑒定及其產(chǎn)酶培養(yǎng)基的統(tǒng)計學(xué)優(yōu)化
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 卡拉膠降解細(xì)菌的篩選
        2.2.2 產(chǎn)卡拉膠酶細(xì)菌的鑒定
        2.2.3 卡拉膠酶活力的測定
        2.2.4 卡拉膠酶培養(yǎng)基的統(tǒng)計學(xué)優(yōu)化
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 卡拉膠降解細(xì)菌KL-A的分離與鑒定
        2.3.2 Cellulophaga sp.KL-A產(chǎn)卡拉膠酶培養(yǎng)基的統(tǒng)計學(xué)優(yōu)化
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 Cellulophaga sp.KL-A中ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce的克隆表達(dá)與酶學(xué)性質(zhì)的研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 引物
        3.1.5 培養(yǎng)基
        3.1.6 溶液及緩沖液
        3.1.7 主要分析軟件
    3.2 基本方法
        3.2.1 細(xì)菌基因組DNA的提取
        3.2.2 PCR擴(kuò)增體系及程序
        3.2.3 PCR產(chǎn)物切膠回收純化
        3.2.4 目的片段與載體連接
        3.2.5 感受態(tài)細(xì)胞的制備(化學(xué)轉(zhuǎn)化)
        3.2.6 克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞
        3.2.7 限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
        3.2.8 重組表達(dá)的載體pET32a(+)-CgiA2_Ce的構(gòu)建
        3.2.9 重組ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce的表達(dá)和純化
        3.2.10 重組ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce的酶學(xué)性質(zhì)研究
        3.2.11 重組酶酶促反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)的測定
        3.2.12 重組ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce降解方式及降解產(chǎn)物的研究
    3.3 實驗結(jié)果與分析
        3.3.1 Cellulophaga sp.KL-A的全基因組序列分析及CgiA2_Ce序列比對分析
        3.3.2 重組表達(dá)載體的體系構(gòu)建
        3.3.3 重組酶CgiA2_Ce的表達(dá)和分離純化
        3.3.4 重組ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce酶學(xué)性質(zhì)研究
        3.3.5 重組酶CgiA2_Ce降解方式及降解產(chǎn)物的分析
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Purification20and20characterization20of20novel20κ-carrageenase20from20marine20Tamlana20sp.HC4[J]. 孫飛雪,馬悅欣,王穎,劉倩.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2010(06)
[2]系列ι-卡拉膠寡糖制備及其電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜序列分析[J]. 楊波,于廣利,郝翠,趙峽,嵇國利,胡艷南,王玉峰.  高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報. 2010(02)
[3]不同分子量的角叉菜（Chondrus20ocellatus）λ-卡拉膠的抗氧化活性[J]. 周革非,邢榮蓮,孫利芹,滕立,張全斌,徐祖洪.  海洋與湖沼. 2009(05)
[4]試驗設(shè)計與優(yōu)化[J]. 李波,徐澤民,李方,張新申.  中國皮革. 2003(01)
[5]寡糖及其衍生物的生物活性研究進(jìn)展[J]. 狄維,王林,王升啟.  中國藥物化學(xué)雜志. 2002(04)
[6]多糖抗病毒作用研究進(jìn)展Ⅱ.硫酸多糖抗病毒作用[J]. 王長云,管華詩.  生物工程進(jìn)展. 2000(02)
[7]多糖抗病毒作用研究進(jìn)展Ⅰ.多糖抗病毒作用[J]. 王長云,管華詩.  生物工程進(jìn)展. 2000(01)
[8]一種用途廣泛的海藻膠——卡拉膠[J]. 華漢峰.  水產(chǎn)科學(xué). 1990(01)

博士論文
[1]海洋微生物多糖水解酶的基因克隆和高效表達(dá)[D]. 劉光磊.中國海洋大學(xué) 2012

碩士論文
[1]海洋交替假單胞菌QY203產(chǎn)κ-卡拉膠酶研究[D]. 李尚勇.中國海洋大學(xué) 2012
[2]響應(yīng)面法優(yōu)化重組枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)青霉素G�；竅D]. 仇晶晶.浙江理工大學(xué) 2012
[3]響應(yīng)面法優(yōu)化茁霉多糖的發(fā)酵工藝[D]. 劉杰.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]澳大利亞厚皮海綿（Craniella20austrialiensis）共附生鏈霉菌DA11幾丁質(zhì)酶的研究[D]. 韓悅.上海交通大學(xué) 2008



本文編號：3175820