卡拉膠（Carrageenan）是一種親水性的多糖物質,從某些海藻細胞壁提取的、由β-1,3-D-半乳糖和α-1,4-D-半乳糖為基本骨架,交替連接所形成的線性硫酸多糖,主要分為三類：λ-（Lamda）型、ι-（Iota）型和κ-（Kappa）型�？ɡz的降解產(chǎn)物寡糖具有廣泛的生物活性,如免疫調節(jié)、抗凝血、抗腫瘤、抗病毒等作用�？ɡz降解酶是一種多糖水解酶,通過作用于卡拉膠的p-1,4糖苷鍵來水解卡拉膠,其水解產(chǎn)物主要為偶數(shù)卡拉膠寡糖。目前已報道的卡拉膠酶都歸屬于糖水解酶家族。對不同類型的卡拉膠酶結構及其功能、底物專一性等研究,具有重要的理論意義和實踐價值。另外,利用卡拉膠酶也可以對卡拉膠硫酸基團的結構和功能之間的關系進行研究,對卡拉寡糖工業(yè)化應用、細菌卡拉膠代謝研究等方面也具有重要意義。而且酶解法制備卡拉膠寡糖的底物專一、條件溫和,能解決傳統(tǒng)化學和物理降解法不易控制、產(chǎn)物分布不均勻的缺點,從而為進一步研究卡拉膠寡糖的生物活性提供幫助。本論文從漳州市東山島海域海水、養(yǎng)殖海水及紅藻藻體上分離得到8株具有卡拉膠及瓊膠降解功能的菌株,其中一株編號KL-A經(jīng)平板劃線,根據(jù)平板上水解圈的大小及發(fā)... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
Contents
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 海洋多糖及多糖水解酶
    1.2 卡拉膠結構、性質及應用
        1.2.1 卡拉膠的結構組成與分類
        1.2.2 卡拉膠的理化性質
        1.2.3 卡拉膠的應用
    1.3 卡拉膠寡糖
        1.3.1 卡拉膠寡糖的制備方法
        1.3.2 卡拉膠寡糖的分離純化與寡糖結構的鑒定方法
        1.3.3 卡拉膠寡糖的生物活性
    1.4 卡拉膠酶
        1.4.1 卡拉膠降解酶的研究進展
        1.4.2 卡拉膠酶的應用
        1.4.3 卡拉膠降解酶的應用前景展望
    1.5 菌株發(fā)酵產(chǎn)酶的優(yōu)化方法
        1.5.1 非統(tǒng)計學方法
        1.5.2 統(tǒng)計學方法
    1.6 本論文的研究思路、目的與意義
第二章 ι-卡拉膠降解細菌的篩選鑒定及其產(chǎn)酶培養(yǎng)基的統(tǒng)計學優(yōu)化
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 卡拉膠降解細菌的篩選
        2.2.2 產(chǎn)卡拉膠酶細菌的鑒定
        2.2.3 卡拉膠酶活力的測定
        2.2.4 卡拉膠酶培養(yǎng)基的統(tǒng)計學優(yōu)化
    2.3 實驗結果
        2.3.1 卡拉膠降解細菌KL-A的分離與鑒定
        2.3.2 Cellulophaga sp.KL-A產(chǎn)卡拉膠酶培養(yǎng)基的統(tǒng)計學優(yōu)化
    2.4 小結與討論
第三章 Cellulophaga sp.KL-A中ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce的克隆表達與酶學性質的研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株、質粒和感受態(tài)細胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 引物
        3.1.5 培養(yǎng)基
        3.1.6 溶液及緩沖液
        3.1.7 主要分析軟件
    3.2 基本方法
        3.2.1 細菌基因組DNA的提取
        3.2.2 PCR擴增體系及程序
        3.2.3 PCR產(chǎn)物切膠回收純化
        3.2.4 目的片段與載體連接
        3.2.5 感受態(tài)細胞的制備(化學轉化)
        3.2.6 克隆質粒轉入感受態(tài)細胞
        3.2.7 限制性內切酶酶切反應
        3.2.8 重組表達的載體pET32a(+)-CgiA2_Ce的構建
        3.2.9 重組ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce的表達和純化
        3.2.10 重組ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce的酶學性質研究
        3.2.11 重組酶酶促反應動力學參數(shù)的測定
        3.2.12 重組ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce降解方式及降解產(chǎn)物的研究
    3.3 實驗結果與分析
        3.3.1 Cellulophaga sp.KL-A的全基因組序列分析及CgiA2_Ce序列比對分析
        3.3.2 重組表達載體的體系構建
        3.3.3 重組酶CgiA2_Ce的表達和分離純化
        3.3.4 重組ι-卡拉膠酶CgiA2_Ce酶學性質研究
        3.3.5 重組酶CgiA2_Ce降解方式及降解產(chǎn)物的分析
    3.4 小結與討論
第四章 總結與展望
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[4]試驗設計與優(yōu)化[J]. 李波,徐澤民,李方,張新申.  中國皮革. 2003(01)
[5]寡糖及其衍生物的生物活性研究進展[J]. 狄維,王林,王升啟.  中國藥物化學雜志. 2002(04)
[6]多糖抗病毒作用研究進展Ⅱ.硫酸多糖抗病毒作用[J]. 王長云,管華詩.  生物工程進展. 2000(02)
[7]多糖抗病毒作用研究進展Ⅰ.多糖抗病毒作用[J]. 王長云,管華詩.  生物工程進展. 2000(01)
[8]一種用途廣泛的海藻膠——卡拉膠[J]. 華漢峰.  水產(chǎn)科學. 1990(01)

博士論文
[1]海洋微生物多糖水解酶的基因克隆和高效表達[D]. 劉光磊.中國海洋大學 2012

碩士論文
[1]海洋交替假單胞菌QY203產(chǎn)κ-卡拉膠酶研究[D]. 李尚勇.中國海洋大學 2012
[2]響應面法優(yōu)化重組枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)青霉素G�；竅D]. 仇晶晶.浙江理工大學 2012
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本文編號：3175820