鰤諾卡氏菌病是海水和淡水魚類中流行一種慢性傳染病,給水產(chǎn)行業(yè)帶來嚴重危害,病原菌為鰤諾卡氏菌（Nocardia20seriolae）。該病原菌能夠引起機會性感染,當生存環(huán)境惡劣,魚體自身免疫功能不全,生長情況差或者魚體存在傷處和缺陷時,通過創(chuàng)傷或者飼料喂養(yǎng)等媒介均可以感染鰤諾卡氏菌,引起一種急性或慢性化膿或肉芽腫性病變,主要癥狀是肝臟、腎臟和脾臟處有明顯肉眼可觀察到的結(jié)節(jié)（肉芽腫）,心和鰾上偶爾也可見。mce1A基因編碼的細胞侵襲相關蛋白是結(jié)合分支桿菌（Mycobacterium20tuberculosis）的毒力蛋白之一,隸屬哺乳動物細胞入侵因子蛋白家族,決定結(jié)核分枝桿菌侵襲性表型。本文以22株不同魚源的致病性鰤諾卡氏菌為研究目標,針對鰤諾卡氏菌的哺乳動物細胞入侵因子蛋白進行生物學分析,并對其中mce1A基因進行克隆及表達分析,以期了解mce1A基因在鰤諾卡氏菌致病機制中的作用。本文采用熒光定量PCR檢測鰤諾卡氏菌在卵形鯧鲹內(nèi)的菌載量動態(tài)變化。在急性感染階段,被檢測組織中均發(fā)現(xiàn)鰤諾卡氏菌存在,表明可以在不同組織內(nèi)定植,分布廣泛。其中,腎組織中的菌載量最高,揭示腎組織是鰤諾卡氏菌侵染的... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1 鰤諾卡氏菌概況
        1.1 生物學特性
        1.2 鰤諾卡氏菌的致病性
        1.3 鰤諾卡氏菌的診斷檢測技術進展
        1.4 鰤諾卡氏菌病防治研究進展
    2 鰤諾卡氏菌致病因子
    3 致病性放線菌毒力因子的結(jié)構與功能
        3.1 MCE蛋白家族概況
        3.2 Ag85復合物
        3.3 PE/PPE 家族蛋白
        3.4 Cho D
        3.5 磷脂酶C
    4 研究目的及意義
第二章 鰤諾卡氏菌侵染卵形鯧鲹后各組織菌載量動態(tài)變化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 標準曲線
        2.2.2 鰤諾卡氏菌侵染卵形鯧鲹后魚體各組織菌載量的動態(tài)變化
        2.2.3 檢測死亡高峰期鰤諾卡氏菌對卵形鯧鲹的組織嗜性
    2.3 討論
第三章 鰤諾卡氏菌mce1A基因的克隆
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 MCE蛋白家族驗證實驗
        3.2.2 PCR擴增結(jié)果
        3.2.3 mce1A基因全序列
        3.2.4 信號肽分析結(jié)果
        3.2.5 跨膜分析結(jié)果
        3.2.6 mce1A氨基酸序列分析
        3.2.7 mce1A氨基酸序列的同源性分析
        3.2.8 構建系統(tǒng)進化樹
    3.3 討論
第四章 鰤諾卡氏菌mce1A基因原核表達
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 PCR結(jié)果
        4.2.2 質(zhì)粒的雙酶切
        4.2.3 重組蛋白的誘導表達
        4.2.4 重組蛋白原核表達條件的優(yōu)化
        4.2.5 重組蛋白的Western Blot檢測
        4.2.6 重組蛋白的可溶性檢測
        4.2.7 融合蛋白的純化
    4.3 討論
第五章 鰤諾卡氏菌MCE1A亞單位疫苗免疫保護力研究
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 免疫接種成活率
        5.2.2 MCE1A蛋白免疫 30d后的免疫保護效果
    5.3 討論
第六章 鰤諾卡氏菌索狀因子亞單位疫苗免疫保護力研究
    6.1 材料與方法
        6.1.1 材料
        6.1.2 方法
    6.2 結(jié)果
        6.2.1 索狀因子免疫接種成活率
        6.2.2 索狀因子免疫 15d后的免疫保護力
        6.2.3 索狀因子免疫 30d后的免疫保護力
    6.3 討論
全文總結(jié)
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3176333