由于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的抗生素濫用,導(dǎo)致水產(chǎn)致病菌的耐藥性逐年增加,嚴(yán)重危害食品安全。本文以淡水魚(yú)的腸道為樣品,分離致病菌和噬菌體,研究魚(yú)類消化道中噬菌體種群多樣性,同時(shí)采用分子生物學(xué)方法,篩選宿主噬菌體受體分子相關(guān)基因。收集62份淡水魚(yú)腸道樣品,分離致病菌和噬菌體。使用TCBS、SS和MAC三種選擇性培養(yǎng)基,共分離到445株革蘭氏陰性菌,并作為指示菌分離噬菌體。通過(guò)富集培養(yǎng)和雙層平板法,分離到75株噬菌體。通過(guò)分析16S rRNA基因?qū)λ拗骶M(jìn)行鑒定,結(jié)果顯示,75株宿主菌分布在3個(gè)科、11個(gè)屬。曾經(jīng)被報(bào)道的宿主菌包括:氣單胞菌屬（Aeromonas）37株,弧菌屬（Vibrio）1株,檸檬酸菌屬（Citrobacter）19株,沙雷氏菌屬（Serratia）5株,摩根氏菌屬（Morganella）2株和變形桿菌屬（Proteua）3株。首次被發(fā)現(xiàn)的宿主菌包括:腸桿菌屬（Enterobacter）2株,步丘氏菌屬（Buttiauxella）2株,鄰單胞菌屬（Plesiomonas）2株,克呂沃爾氏菌屬（Kluyvera）1株和普羅維登斯菌屬（Providencia）1 株。本實(shí)驗(yàn)中分離株數(shù)最... 

【文章來(lái)源】：天津科技大學(xué)天津市

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 水產(chǎn)品的重要性和現(xiàn)狀
    1.2 重要的水產(chǎn)致病菌
        1.2.1 氣單胞菌屬
        1.2.2 弧菌屬
        1.2.3 變形桿菌屬
        1.2.4 鄰單胞菌屬
        1.2.5 摩根菌屬
    1.3 噬菌體
        1.3.1 噬菌體概述
        1.3.2 噬菌體的受體
        1.3.3 噬菌體的生態(tài)學(xué)意義
    1.4 本文的研究意義及其內(nèi)容
        1.4.1 本文研究意義
        1.4.2 本文研究?jī)?nèi)容
2 材料與方法
    2.1 樣品來(lái)源
    2.2 選擇性培養(yǎng)基分離水產(chǎn)致病菌
        2.2.1 選擇性培養(yǎng)基的種類和成分
        2.2.2 選擇性培養(yǎng)基的分離原理
        2.2.3 潛在水產(chǎn)致病菌的分離
    2.3 乳酸菌的分離
    2.4 芽孢桿菌的分離
    2.5 噬菌體的分離
        2.5.1 噬菌體的富集
        2.5.2 雙層平板法分離噬菌體
        2.5.3 噬菌體的純化
        2.5.4 噬菌體的保存
    2.6 致病菌的鑒定
        2.6.1 基因組DNA的提取
        2.6.2 致病菌16S rRNA基因的PCR擴(kuò)增
        2.6.3 宿主菌16S rRNA基因的克隆及測(cè)序
        2.6.4 使用BLAST工具分析宿主菌16S rRNA基因
        2.6.5 構(gòu)建致病菌16S rRNA基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)
    2.7 氣單胞菌屬菌株的分型
        2.7.1 氣單胞菌的PFGE分型
        2.7.2 氣單胞菌屬菌株的RAPD分型
        2.7.3 氣單胞菌屬菌株的ERIC-PCR分型
        2.7.4 分析電泳結(jié)果構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)
    2.8 氣單胞菌致病性分析
        2.8.1 氣單胞菌毒力基因的PCR擴(kuò)增
        2.8.2 溶血性分析
    2.9 氣單胞菌噬菌體的生物學(xué)特性分析
        2.9.1 噬菌體滴度測(cè)定
        2.9.2 噬菌體宿主范圍的測(cè)定
        2.9.3 噬菌體對(duì)宿主菌的生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)
        2.9.4 pH對(duì)噬菌體穩(wěn)定性的影響
    2.10 氣單胞菌噬菌體受體相關(guān)基因的遺傳學(xué)分析
        2.10.1 構(gòu)建氣單胞菌轉(zhuǎn)座子文庫(kù)
        2.10.2 噬菌體抗性突變株對(duì)噬菌體的吸附分析
        2.10.3 轉(zhuǎn)座子Tn5G插入位點(diǎn)的確定
        2.10.4 突變子泳動(dòng)能力(swimming motility)的測(cè)定
3 結(jié)果與討論
    3.1 淡水魚(yú)消化道內(nèi)的微生物生態(tài)分析
        3.1.1 潛在致病菌的分離
        3.1.2 乳酸菌的分離
        3.1.3 芽孢桿菌的分離
    3.2 淡水魚(yú)消化道內(nèi)噬菌體的分離
    3.3 噬菌體宿主菌的鑒定和同源性分析
        3.3.1 宿主菌16S rRNA基因的鑒定
        3.3.2 宿主菌16S rRNA基因的同源性分析
    3.4 氣單胞菌分型研究
        3.4.1 氣單胞菌的RAPD分型
        3.4.2 氣單胞菌的ERIC-PCR分型
        3.4.3 氣單胞菌的PFGE分型
        3.4.4 氣單胞菌的毒力基因擴(kuò)增和溶血性分析
    3.5 氣單胞菌噬菌體宿主范圍的測(cè)定
    3.6 噬菌體的生物學(xué)特性研究
        3.6.1 噬菌體對(duì)宿主菌的抑制效應(yīng)
        3.6.2 噬菌體與菌株的組合對(duì)生長(zhǎng)抑制的影響
        3.6.3 pH對(duì)噬菌體穩(wěn)定性的影響
    3.7 噬菌體受體相關(guān)基因的遺傳分析
        3.7.1 構(gòu)建轉(zhuǎn)座子文庫(kù)篩選噬菌體耐受突變株
        3.7.2 突變株的表型
        3.7.3 鑒定突變子的插入位點(diǎn)
4 結(jié)論
5 展望
6 參考文獻(xiàn)
7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況
8 致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3175556